初始染菌校正因子测定操作规程.doc

PAGE 1 PAGE 6 一次性使用医用高分子产品 初始染菌校正因子的测定操作规程 ××××××××公司 1、输液（血）器初始染菌数校正因子的测定 1.1内壁校正因子 1.1.1洗脱液的制备：取三套任意规格新制备的样品，在净化操作台上，分别注入15毫升生理盐水，将两端封闭后反复震荡，使盐水在管路内往复运行数十次以上。将冲洗液在无菌的状态下置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。 1.1.2营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克，加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121℃高压灭菌20分钟，放入55 1.1.3接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，将约10-15毫升已融化的50℃ 1.1.4培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35℃ 1.1.5菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。 重复1.1.1-1.1.5步，分别进行第二次、第三次、第四次洗脱，收集各次洗脱菌落数，填入数据表中。 1.1.6内壁校正因子的计算：用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，去除率的倒数即为内壁校正因子。 1.2、外壁校正因子 1.2.1洗脱液的制备：在净化操作台上，用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭样品的外表面，然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。 重复上述1.1.2-1.1.6操作。即得到外壁校正因子。 1.3、琼脂覆盖：在净化操作台上，将上述经过4次内壁外壁冲洗后的样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段，任取两段置入皿碟中，将25-30毫升50℃左右的营养琼脂培养基注入皿碟，覆盖在样品上，立即盖好。冷却后倒置，放入培养箱中培养，48小时后计数，每套样品做2个平行样，取平均数，乘以样品总长度（ 表1输血器校正因子测定数据表 测定项目 第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率% 平均去除率 校正因子 内壁： 外壁： 表2输液器校正因子测定数据表 测定项目 第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率% 平均去除率 校正因子 内壁 外壁： 检验： 复核： 日期：2006/1/14 2、穿刺针初始染菌数校正因子的测定 2.1内壁校正因子 2.1.1洗脱液的制备：选取1个批次新制备的穿刺针样品15套，分成三份，每份5套为一组样品。在净化操作台上，每组产品分别注入15毫升生理盐水，将两端封闭后反复震荡，使盐水在管路内往复运行数十次以上，然后将冲洗液置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。 2.1.2营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克，加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121℃高压灭菌20分钟，放入55 2.1.3接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，将约10-15毫升已融化的50℃ 2.1.4培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35℃ 2.1.5菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。 重复2.1.1-2.1.5步，分别进行第二次、第三次、第四次洗脱，收集各次洗脱菌落数，填入数据表中。 2.1.6内壁校正因子的计算：用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，去除率的倒数即为内壁校正因子。 2.2、外壁校正因子 2.2.1洗脱液的制备：在净化操作台上，用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭每组样品的外表面，然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。 重复上述2.1.2-2.1.6操作。即得到外壁校正因子。 2.3、琼脂覆盖：在净化操作台上，将上述经过4次内壁外壁冲洗后的穿刺针样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段，任取两段置入皿碟中，将25-30毫升50℃左右的营养琼脂培养基注入皿碟，覆盖在样品上，立即盖好。冷却后倒置，放入培养箱中培养，48小时后计数，每套样品做2个平行样，取平均数，乘以样品总长度（ 测定结果详见表3。 表3穿刺针校正因子测定数据表 测定项目 第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率% 平均去除率 内壁： 外壁： 校正因子 内壁：