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三节PCR技术原理;2.3.1 核酸体外扩增最早的设想;2.3.2 聚合酶链反应的发明;PCR传奇;2.3.3 PCR 原理;5’ amplicon 3’;Cycle 2 4 分子;2.3.4 PCR反应过程;一般需使用一对引物
新合成的链又可作为模板;2.3.5 PCR反应体系;dNTP：
终浓度0.2mM(即饱和浓度)（pH7.0）
4种dNTP应平衡，提高忠实性
使用时应考虑Mg2+，引物，产量之间的关系
如序列分析和制备探针时，用20-40mm?
引物：
各1mm，即1pmol/ml
OD260=1时:
dsDNA 50mg/ml（molecular cloning）
ssDNA 40mg/ml oligo 33mg/ml;引物与退火温度：;避免二级结构的形成
二聚体 二级结构
G/C和A/T分布尽管均匀，一般G+C% 45-55%
Oligo dT/oligo dC除外
其它，如5’末端，限制酶位点的长度
随机引物 10-12bp; 模 板;;连接介导PCR;逆转录PCR (retrotranscription PCR, RT PCR);锚定PCR (anchored PCR);反向PCR (inverse PCR,inPCR);2.3.7 PCR技术的应用;人类基因组工程：用散布重复序列产生DNA标志；遗传图谱的构建(检测DNA、 多态性或精子绘图)；物理图谱的构建；测序，表达图谱
法医：犯罪现场标本分析；HLA-DQ
肿瘤：胰癌、结肠癌、肺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、血液恶性肿瘤
组织和群体生物学：遗传聚类研究；动物保护研究；生态学；环境科学；实验遗传学。
古生物学：考古与博物馆标本分析
动物学：动物传染病的诊断等
植物学：检测植物病原等 ; 2.3.9 PCR技术未来发展的方向;回答问题
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