血浆纤维蛋白原Fbg测定作业指导书.doc

血浆纤维蛋白原Fbg测定作业指导书 1. 实验原理 确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入纤维蛋白原试剂，采用波长为660nm的光照射样本，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，从散射光光强度的测定，可以作出凝血曲线，通过Percentage Detection Method法求得凝血时间，再通过凝血时间，求出Fbg含量。 2. 标本采集 2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。 2.2 3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。 3. 标本存放：1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，室温放置不超过2小时，2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月），只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。 4. 标本运输：低温条件下运输。 5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。 6. 实验材料： 6.1 德国Dade Behring Marburg 公司凝血酶试剂，每瓶加1ml蒸馏水溶解(20人份)，未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期.复溶试剂2～8℃保存不超过5天。 6.2 Owren′s巴比妥绥冲液(PH7.35±0.1)用于标本的稀释，2～8℃贮存到说明书上有效期。 6.3 Dade Control质控血浆。用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟，才能使用或分装.复溶后，室温保存2小时，2～8℃4小时。 7. 仪器设备： 7.1 仪器名称：Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪 7.2 仪器厂家：日本Sysmex公司 7.3 仪器型号：Sysmex CA-1500 7.4 仪器技术参数： 7.4.1 速度：最快检测速度180测试/小时，组合检测约140测试/小时 7.4.2 试剂位：36个，具冷藏功能。 7.4.3 样本位：50个，可自动连续添加。 7.5 仪器校准程序： 7.5.1 校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。 7.5.2 校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行) 8. 操作步骤： 8.1 检查前准备： 8.1.1 清空废液瓶，清空反应杯抛弃槽。 8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线) 8.1.3 添加清洁液试剂，清洗用蒸馏水等。 8.2 开机 先开打印机再开主机，开机后仪器自检，约15分钟，屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”，表示仪器预热完成，进入系统准备工作状态，可进行测定。 8.3 输入工作清单：从主菜单选Work List→出现第一架样本工作清单输入画面，选ID NO Entry输入第一个样本号→按相应实验项目名称键Fbg，并同时输入此标本的其他测试项目，若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile #1组合选项选择，选中项目相应位置标记为“○”，选完项目后按ENTER确认，要删除某项目时只需按该项目（按键如PT○变为PT-）即可，→用↑↓键，同样输入其他标本编号项目。（快速输入可用Repeat键，输入重复标本数，复制同样项目的输入. 8.4 放置样本：按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上，并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本) 8.5 按Start键开始测定. 盖好遮光盖，确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按Start键，进样开始，→测定进行，仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3，8.4，继续输入其他架样本工作清单，按Rigester，继续确认测试任务，添加样本架继续测试，→测定完成，测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态. 8.6 每日维护：完成每日的测定后，关机前维护. 8.6.1 冲冼针Rinse Probe 8.6.2 清空废液瓶，和已使用过的反应杯. 8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱. 8.7 关机：先关主机，再关打印机. 9. 检验结果的判断与分析： 9.1 仪器测定Fbg线性范围在0.25g/L-10g/L，测定完成仪器将显示每个参数的计算结果（包括凝固时间与Fbg含量g/L），若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息： ﹡﹡﹡，﹡出现错误，不能得到分析数据 ˉˉˉ，ˉ不能计算参数 ＋＋＋，＋数值超出线性范围. 9.2 仪器设定Fbg参考范围在1.7-4.5g/L，如果得到一个不正常数值，在数据的左侧将出现下列标记： ﹡ 出现错误信息 数据低于可报告的低限 数据高于可报告的高限 10. 质量控制：每批样本同时测定两个浓度水