未成熟卵母细胞的冷冻保存.ppt

研究现状 1977年，Whittingham首次冻存小鼠成熟卵母细胞获得 成功，揭开了卵母细胞冷冻保存的序幕。 1986年，Chen 用慢速冷冻-快速复温方法首次冻存人成 熟卵母细胞成功并获得妊娠26周胎儿。 1997年，Porcu 对冻融成熟卵母细胞行ICSI，受精率明显提 高，实现了新的突破。 1998年, Tucke采用常规慢速冷却快速复温冷冻人类 GV期卵母细胞获得新生儿。 1999年，Kuleshoval 用玻璃化法冻存人类成熟卵母细 胞获得新生儿。 冻存人类成熟卵资料 冻存人类未成熟卵资料 冻存未成熟卵母细胞的优点 PCOS病人的未成熟卵母细胞 超排卵行ICSI患者的未成熟卵母细胞 剖腹产手术患者卵巢内的未成熟卵母细胞 良性妇科疾病切除的卵巢组织中的未成熟卵母细胞 IVM 周期得到的未成熟卵母细胞 应用前景 影响未成熟卵冷冻复苏的因素 影响未成熟卵冷冻复苏的因素  形态学因素 卵母细胞发育阶段：MⅡ GV 卵的质量： 卵的大小：越大，冻存后存活率越低 冷冻方法及原理 慢速冷冻-快速复温原理 玻璃化冷冻 将高浓度的冷冻保护剂在超低温环境下凝固 形成不规则的玻璃化样固体 保持了液态时的正常分子与离子分布 玻璃化冷冻载体 玻璃化方法 一步法和多步法 冷冻保护剂及其浓度也不尽相同 玻璃化与慢冻优缺点 表8 不同冷冻方法对冻融GV期卵纺锤体的影响 表9 不同冷冻方法冻融GV期卵有、无纺锤体比较 表10 不同冷冻方法对冻融MⅡ期卵纺锤体的影响 谢 谢！ 一步乙二醇 乙二醇、蔗糖 人成熟及未成熟卵 电子铜网 不能充分保证渗透性 冷冻剂乙二醇进入 细胞内 乙二醇+ 乙二醇、二甲基亚砜 动物成熟卵及人0PN 冷冻环 DMSO的毒性尚有争议 二甲基亚砜 、蔗糖 三步乙二醇A 乙二醇、蔗糖 动物及人成熟卵 冷冻环 充分保证渗透性 冷冻剂乙二醇进入 细胞内 三步乙二醇B 乙二醇 动物未成熟卵 麦管 没有蔗糖玻璃化作用差 组别 冷冻保护剂 文献报道 冷冻卵种类 冷冻载体 特点 四种玻璃化冷冻的特点 优点: 冷冻保护剂浓度低， 对细胞毒性损害较小 缺点: 需昂贵的冷冻仪冷冻时间长 脱水慢，易形成冰晶而造成 物理性损伤 优点: 操作简单快速，只需要简单的设 备,无需昂贵的冷冻仪大大缩短 冷冻时间提高工作效率，有较 理想的存活率 缺点: 高浓度的玻璃化冷冻保护剂对细 胞有较大的毒性，在一定的程度 上影响了解冻后卵母细胞及胚胎 的发育能力 慢速冷冻-快速复温冷冻 玻璃化冷冻 本中心4年来进行了冻存小鼠及人类未成熟卵母细胞的研究 本中心资料 （一）体外成熟培养 体外成熟培养技术是冻存未成熟卵母细胞的前提，本中心对动物及人的未成熟卵母细胞体外成熟培养进行了研究。 ) 37(88.1) 42(80.0)# 52(78.8)# 57(86.4) 66 EGF+17β-E2+丙酮酸组 25(75.6) 33(68.7) 48(75.0)# 50(78.1) 64 丙酮酸组 26(81.3) 32(76.2) 42(63.6) 50(75.8) 66 17β-E2组 30(76.9) 39(79.6) 49(75.4) 50(76.9) 65 EGF组 1