课题一ALB1基因对烟曲霉菌角膜粘附力影响的分析;课题二小鼠角膜抑制白色念珠菌增殖的机制初探.pdfVIP

目 录 课题一ALBl基因对烟曲霉菌角膜粘附力影响的研究………．．I 中文摘要…………………………………………I 英文摘要…………………………………………ⅡI 主要符号表………………………………………．Ⅵ 引言……………………………………………．．1 第一章实验材料和试剂………………………………3 第二章主要的试验方法及实验步骤……………………．．6 第三章实验结果…………………………………．．10 第四章讨论………………………………………13 参考文献…………………………………………15 课题--d,鼠角膜抑制白色念珠菌增殖的机制初探…………．．16 中文摘要…………………………………………16 英文摘要…………………………………………18 引言……………………………………………．19 第一章实验材料和试剂……………………………．．20 第二章主要的实验方法及实验步骤……………………．2l 第三章实验结果…………………………………．．23 第四章讨论………………………………………26 参考文献…………………………………………28 综述……………………………………………．29 综述参考文献……………………………………．．36 攻读学位期间的研究成果……………………………．38 致谢……………………………………………．39 课题一ALBl基因对烟曲霉菌角膜粘附力影响的研究 专业 眼科学 研究生 席海杰 导师 王宜强研究员 摘要 目的 探索烟曲霉菌ALBl基冈在真菌与角膜粘附中的作用，为阐明真菌与角膜相 互作用的分子机制提供资料。 方法 分别利用烟曲霉菌野生型菌株(B5233)与基因突变株(△albl)孢子粘附 单层角膜上皮细胞及角膜的体外器官和体内动物模型，通过检测细胞和角膜上粘 附孢子的数量，确定ALBI基因突变对烟曲霉菌角膜粘附力的影响。 1．比较两种菌株在单层角膜上皮细胞的粘附量 X 将生长良好的角膜上皮细胞(HCEC)，接种于24孔板，每孔l105个细胞， 培养6-8小时细胞贴壁，后换无血清培养液过夜。加真菌孢子悬液，真菌孢子量 与细胞量比例为10：l，37。C、饱和湿度5％CO：的培养箱中孵育60min，用生理盐 水冲洗三次，孔中加荧光白染色30s，荧光显微镜照相。再加细胞裂解液裂解上 皮细胞，样品按不同稀释度均匀涂布于沙氏培养基平板上，37℃培养24h，计数 形成的菌落。实验重复3次。 2．小鼠眼器官模型观察两种菌株粘附量的区别 Balb／c小鼠5只，经处理后取出眼球，置于96孔板内。lO只眼分为两组， 37℃、5％C02的培养箱中孵育30min。取出眼球，用生理盐水冲洗三次，每组3 只眼球检测载菌量；另2只眼球中性甲醛固定，石蜡包埋，切片后糖原染色(PAS 染色)观察孢子粘附情况。实验重复5次。 1 3．体内实验比较两种菌粘附力的区别 8一10周Balb／c小鼠10只，分为两组，每组5只。腹腔麻醉，用滤纸片擦拭 角膜表面，再将约0．5cm长的输液管套在小鼠眼球上，缝线固定。管内加0．5％EDTA 20ul，作用lh。移液器吸去EDTA后，两组分别加入两种菌株的真菌孢子悬液(浓 X 度l 109CFU／mL)10|l l，作用lh，去除套管，颈椎脱臼处死小鼠，摘取眼球用 生理盐水洗三次。每组3只眼球用于载菌量检测，计数形成的菌落；另2只眼球 用中性甲醛固定，石蜡包埋，糖原染色(PAS染色)观察孢子粘附。实验重复2 次。 仕田 当日7K 1．角膜上皮细胞粘附实验检测两种菌株粘附量的区别 1．荧光显微镜图片可见B5233菌株的粘附密度明显高于△albl菌株。 2．真菌负荷检测，其中B5233菌株组粘附数量为15l635士27330个／孔 B5233菌株粘附率大于△albl菌株。且两组差异具有统计学意义(P O．01)。 2．眼器官模型检测两种菌株的角膜粘附量区别 真菌负荷检测，两种菌株粘附