植物组织器官培养技术.ppt

③环境条件 对于幼胚培养，初期弱光和黑暗更适宜，幼胚启动发育后给予和其自然光周期一致的光照条件有利于幼胚发育。 培养的温度一般以该植物种子萌发的适宜温度为好。 ④培养材料植物培养材料的基因型和胚发育程度对离体胚培养有重要影响。显然，材料基因型不同，胚培养的难易程度也不同。胚发育阶段以越幼嫩的胚越难以培养。 二.子房培养(ovary culture)P175 ?子房培养包括授粉前和授粉后的子房培养。 授粉前子房培养是为了获得孤雌生殖的单倍体植株，适用于那些胚囊分离特别困难的植物； 授粉后子房培养适用于那些获得种子特别困难，胚分离不易操作的植物，以获得种子或果实或植株。 1．材料的选择 ? （1）品种间的差异 ? （2）胚囊发育时期：以八核胚囊和成熟胚囊期的子房培养具有较高的诱导频率。 ? 成熟胚囊 三核花粉期 八核胚囊 二核花粉期 单核至四核胚囊 单核靠边期 大孢子四分体 单核中期 胚囊发育时期 花粉发育时期 大麦胚囊发育时期与花粉发育时期的相关性 2．培养基? （1）基本培养基 不同培养基对于子房培养产生愈伤组织的诱导率有直接影响，比较常用的培养基是N6、BN、MS，禾本科作物以N6培养基较常用，其它植物则多用MS和BN。 （2）植物生长调节物质的影响?未授粉的子房培养必须加入适宜种类和浓度的植物生长调节物质（3）蔗糖浓度?蔗糖浓度多在3～10％之间，因不同植物材料而异，一般是诱导培养阶段蔗糖浓度要高一些，分化培养时蔗糖浓度要低一些。? 3.接种方式? 主要考虑两个方面的问题：极性；营养吸收 花柄直插比平放效果好 三.被子植物胚乳培养( endosperm culture)P169 1．概况? 胚乳培养的研究主要集中在以下一些问题的探讨： A、胚乳细胞的全能性。 B、能否通过胚乳培养获得三倍体植株而得到无籽结实； C、研究离体培养条件下胚和胚乳的关系。 Triticum grain 到目前为止，已有40多种植物的胚乳进行了培养。其中苹果、柚、橙、檀香、枸杞、猕猴桃、玉米、大麦、小黑麦、水稻、马铃薯、梨、核桃等的胚乳培养得到了再生植株。其它有的分化出芽、根、叶等或得到愈伤组织。  Plantlets arising from isolated endosperm tissue 2．植物胚乳的发育特性? 植物胚乳可以分为两大类：被子植物胚乳和裸子植物胚乳。 被子植物胚乳是双受精的产物，它由二个极核和一个雄配子融合形成，所以，在染色体倍性上它属于三倍体组织。 裸子植物胚乳在受精前就已形成。裸子植物的胚乳为配子体的一部分，由大孢子直接分裂发育而成，因此它属于单倍体组织。? 3．影响胚乳培养的因素 （1）胚乳的发育时期： 胚乳发育时期大致可分为早期、旺盛生长期和成熟期。旺盛生长期为最佳时期，这时的胚乳细胞处于细胞形成期并保持旺盛的分裂能力。 几种植物胚乳培养的最佳时间(授粉后天数 玉 米 8-12天 大 麦 10～12天 黄 瓜 7～16天 小黑麦 7～14天 （2）基因型? ?? （3）培养条件：常用培养基是MS和White，需要附加水解酪蛋白和酵母提取物。在诱导期一般需要高浓度的生长素、较高的pH，分化期需要较高浓度的细胞分裂素。?（4）胚因子??：胚对胚乳的培养有一定的影响?? 4．胚乳培养的形态发生 愈伤组织形成 最适发育时期的胚乳在离体培养条件下经过一定时间即可形成愈伤组织。 ?直接进行器官分化 §4. 组织培养常见问题及对策P69一、污染及控制1、污染的含义：指在组培过程中培养瓶内滋生菌斑，使培养材料不能正常生长发育，从而导致培养失败的现象。 2、污染原因（从病原菌分析）（1）．细菌污染：菌斑呈黏粘液状，界限比较明显，一般接种后1—2天即能发现。主要是大肠杆菌和链球菌。（2）．真菌污染：菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子接种后3—10天才能发现。主要是霉菌污染。 3、污染途径：（1）．外植体带菌（2）．培养基及接种器具灭菌不彻底（3）．接种操作时带入（4）．环境不清洁 4、污染的预防措施：A、?? 防止外植体带菌（1） 选择好外植体采集时期和采集部位●???? 外植体采集以春秋为宜；●???? 优先选择地上部分作为外植体；●???? 阴雨天勿采，晴天下午采集；●???? 采前喷杀虫剂、杀菌剂或套塑料袋。（2）室内或