第三章 细胞生物学研究方法杨恬.ppt

未分化或低分化细胞的获取途径 胚胎干细胞的培养 培养中的人胚胎干细胞 培养细胞的体外分化和应用目标 细胞融合（cell fusion）又称细胞杂交（cell hybridization），是指用自然或人工的方法使两个或几个不同细胞融合为一个细胞的过程。 大型细胞发酵罐 气流驱动培养系统示意图 组织工程皮肤的制备 　　将细胞及其组分进行分离和纯化，用于研究某一类细胞或细胞组分的特点和功能。 不同的细胞器、大分子和病毒的密度及相应的沉降系数 （四）细胞及其组分的分离和纯化技术（segregation and purification techniques of cellular components） 等密度离心法（isodensity entrifugation） 差速离心法（differential centrifugation） 用于体积差别较大颗粒的分离，例如细胞器的初步分离。差速离心法通过一组离心速度逐渐递增的离心操作步骤使悬浮液中的各种颗粒分离开：首先用低速离心将大颗粒沉降到离心管的底部；取其上清液，再以中等速度离心，使稍大的颗粒沉降到管底；收集上清，再加以高速离心。这样依次离心使各种颗粒逐渐分离 免疫磁珠技术的特异性高并能保持分离细胞的活性 层析技术（chromatography）是根据蛋白质的形态、大小和电荷的差异来进行分离的方法，能纯化并获得非变性的、天然状态的蛋白质。 琼脂糖电泳示意图 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳示意图 流式细胞技术（flow cytometry）用荧光抗体与相应抗原结合，标定欲分离的细胞或细胞器，再通过自动化的激光/光电检测系统高速检测移动中的细胞悬液荧光，从混合的细胞群体中分选出特定的目标细胞。 激光捕获显微切割技术（laser capture microdissection） 可从组织切片上获得目标细胞 无细胞系统（cell free system） （五）生物大分子的分析和鉴定技术（analysis and identification techniques of biomacromolecules） Southern印迹技术 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是利用DNA半保留复制的原理，通过控制实验温度，使DNA处于变性、复性和合成的反复循环中，从而达到在体外快速扩增特异性DNA片段的目的。 基因芯片（gene chip）技术能高效和快速检测基因表达 转基因技术 （六）其他技术（other techniques ） 体细胞核移植 RNAi技术可以简便而迅速地制备特定基因缺失表型的个体，进而研究该基因的功能。 RNAi技术建立的显性阴性突变 A. 双链RNA可以被导入到C.elegans （1）用表达双链RNA的大肠埃希菌喂食蠕虫。（2）直接把双链RNA注入到蠕虫肠道内。B. 野生型蠕虫胚。C. 一个蠕虫胚内与细胞分裂相关基因被双链RNA干扰失活。图中胚显示两个未融合的精子和卵子的细胞核异常位移。 细胞附着的支持物 微载体（microcarrier）、中空纤维（hollow fiber）、微胶囊（microcapsule） 1.请说明原位杂交与免疫细胞化学技术的原理，并比较两者的联系与区别。 ２.何为细胞培养与细胞融合？ ３.请阐述流式细胞技术的原理并说明请应用特点。 ４.列举三种常见的显微镜技术，说明相关的原理与应用特点。 思考题 推荐阅读资料 1.翟中和，王喜忠，丁明孝.细胞生物学.第三版.北京:高等教育出版社，2007 2.胡以平.医学细胞生物学.北京:高等教育出版社，2009 3.王金发.细胞生物学.北京:科学出版社，2003 4.Alberts B, et al. Molecular Biology of the Cell [M].5th ed. NEW YORKLONDON:Garland Publishing,Inc,2008. Cell Nature Science EMBO Annual Review of Cell Biology Trends in Cell Biology Cell Research 科学通报 中国科学 主要期刊杂志 (Cel