细菌培养基的制备灭菌及接种、培养技术.ppt

实 验 二 细菌培养基的配制、灭菌及接种、培养技术 第一部分细菌培养基的制备、灭菌 目的要求 实验材料 实验程序 目 的 要 求 熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。 实 验 材 料 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。 高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻璃珠等。 实 验 程 序 玻璃器皿的洗涤和包装 培养基的制备 无菌稀释水的制备 培养基和玻璃器材等的灭菌 实验程序1 （玻璃器皿的洗涤和包装） 清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。 棉塞的制作 包装培养皿和移液管等。 实 验 程 序2 （培养基的种类） 据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入15～30g/L左右的琼脂。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入3～5g/L左右的琼脂。 实 验 程 序2 （培养基的种类） 常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。 实 验 程 序2（培养基的配制方法和步骤） 1. 取一个300mL烧杯，装150mL蒸馏水。 2. 按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶解。 注意： a. 前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分 b. 可加热促进各成分溶解 c. 加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当补充因蒸发而损失的水量。 实 验 程 序2（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 实 验 程 序2 （培养基的分装和斜面培养基的制作） 实验程序2 （培养基的配制方法和步骤） 实验程序3 （无菌稀释水的制备） 取一个250mL的锥形瓶装90(或99)mL蒸馏水，放30颗玻璃珠(用于打破活性污泥、菌块或土壤颗粒)于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。 另取5支18mm×180mm的试管，分别装9mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。 无菌稀释水为微生物分离实验中所需要的材料。 实验程序4 （培养基和玻璃器材等的灭菌） 加热灭菌有干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 干热灭菌的操作方法 a. 将待灭菌的物品放入恒温箱，将温度调节至160℃并维持2h； b. 把恒温箱的调节旋钮调回零处，待温度降到50℃左右，才能将物品取出。 实验程序4 （培养基和玻璃器材等的灭菌） 湿热灭菌：高压蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法的操作步骤如下： 1. 灭菌锅内加入一定量的水。 2. 将待灭菌的物品放入锅内，并关严锅盖。 注意：器物不能装得太满。 3. 接通电源，进行加热。 4. 排除高压锅内的