热带假丝酵母高效利用甘油研究.pdf

热带假丝酵母高效利用甘油研究 1 1 1 1 1 1 彭健 ，苏静 ，杨晓慧 ，王腾飞 ，汪俊卿 ，王瑞明 1 齐鲁工业大学山东省微生物工程重点实验室，生物工程学院，山东济南 250353 摘要：目的：热带假丝酵母以油脂为底物发酵时会产生副产物甘油，本研究对热带假丝酵母 gk 基因进行过表达，将副产物甘油转化为能量，提高油脂转化利用效率。方法：本研究以 热带假丝酵母Candida tropicalis 1798 中的甘油激酶 （gk）为研究对象，利用PCR 技术获得 同源臂基因gkpR，通过一步法无缝克隆将同源臂和G418抗性基因(kan)连接至pPICzαA 载r 体，同时将解脂假丝酵母Candida lipolytica 1457 中的启动子基因pGAP 无缝连接至载体中 的gkpR，构成质粒pPICzαA-gkp，并电转化至C.tropicalis 1798感受态细胞中，通过一次同 源单交换，将启动子pGK 替换为pGAP。结果：经过G418抗性筛选和PCR 鉴定，成功获 得pGAP 基因替换菌株 C. tropicalis 1798-gkPr；发酵验证结果显示，启动子基因替换 C. 1 v tropicalis 1798在以甘油为底物培养时重组菌OD 值比野生型菌株高46.4%，重组菌培养 600 3 6 基中甘油剩余量比野生菌降低56.1%，表明启动子替换能促进C. tropicalis 1798对甘油吸收 6 2 利用。此外，以油脂为底物进行发酵实验时还发现重组菌产长链二元酸的量比野生菌提高 0 32.7%。结论：通过启动子替换手段构建的重组菌C. tropicalis 1798-gkPr，提高了热带假丝 . 1 1 酵母对于油脂组分中甘油成分的利用效率。 7 1 关键词：gk 基因，热带假丝酵母，一步法无缝克隆,pGAP 基因 0 2 Studiesonefficientutilizationofglycerol of Candidatropicalis 1798 : v i PENGjian, SUjing,YANGXiao-hui,WANGTeng-fei,WANG,Jun-qing,WANGRui-ming X a QiLu University Of Technology ,BiologicalEngineering,JiNanShanDong Province250353 n i Abstract: Candida tropicalis1798 will produces glycerol when fermented grease. h c C.tropicalis1798efficient useofglycerol and itwillprovides energy for fermentation and improve theutilization of grease by genetically modified.In this study, a related glycerol metabolism gene gk in C. tropicalis 1798 was intended to replace the promoter gene.about 500 bp DNA fragment r gkpR in