茄子种子纯度SSR分子标记鉴定方法.pdfVIP

ICS 65.020.20 B 04 DB 12 天 津 市 地 方 标 准 DB12/T 839—2018 茄子种子纯度SSR 分子标记鉴定方法 Method of identifying seed purity of eggplant by using SSR-based marker 2018 - 11 - 07 发布 2018 - 12 - 01 实施 天津市市场和质量监督管理委员会 发 布 DB12/T 839—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由天津市农村工作委员会提出并归口。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、天津市蔬菜研究中心、黑龙江省农业科 学院农产品质量安全研究所。 本标准主要起草人：兰青阔、王利英、赵新、王成、兰璞、乔军、刘婧、陈锐、关海涛、张耀中、 焦贺敏。 I DB12/T 839—2018 茄子种子纯度SSR 分子标记鉴定方法 1 范围 本标准规定了茄子种子纯度SSR分子标记鉴定方法的原理、仪器设备及试剂、方法步骤、纯度计算。 本标准适用于茄子单交种的纯度鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标 准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 种子纯度 seed purity 种子在SSR分子标记带型方面典型一致的程度，用具有本品种特异带型的种子粒数占鉴定样品种子 粒数的百分率表示，以反映某品种特征特性的一致性程度。 3.2 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction (PCR) 一种在体外通过酶促反应扩增特异DNA片段的技术。 3.3 简单重复序列 simple sequence repeat (SSR) 由几个核苷酸（1～6个）为重复单位聚集而成的长达几十个至几百个bp （一般为100～200）的串联 重复序列，又称微卫星序列或短串联重复序列，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。 3.4 分子标记 molecular marker 以蛋白质、核酸分子的多态性为基础，鉴定生物在遗传上的差异。 4 原理 SSR分布于茄子整个基因组，每个位点上重复单位的数目不同造成了品种间的多态性，利用PCR技术 将多态的SSR扩增出来，通过电泳检测扩增产物，利用电泳图谱进行茄子种子纯度鉴定。 5 仪器设备及试剂 1 DB12/T 839—2018 5.1 仪器设备 PCR仪；测序电泳槽；水平电泳槽；高压电泳仪（3000 V，400 mA，400 W）；万分之一电子天平； 微量加样器；磁力搅拌器；台式离心机；紫外-可见成像系统；胶片观察灯；水平摇床；高压灭菌锅； pH计等。 5.2 试剂