2012届高考生物选修一专题复习.pptVIP

　　 相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的容易进入凝胶内部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，移动速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质分子彼此分离。 　　1.如何正确区分破碎动物细胞和植物细胞的原理和方法？ 原理 方法 动物细胞(鸡血细胞) 在低浓度溶液中会吸水甚至涨破 鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液 植物细胞(洋葱细胞) 洗涤剂能够瓦解细胞膜 在切碎的洋葱中，加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 　　2.教材中去除滤液中杂质的三种方案有什么不同？ 原理 方法 方案一 DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 在滤液中加入2 mol/L NaCl溶液，过滤除去不溶杂质；再调节NaCl溶液浓度为0.14 mol/L ，析出DNA，过滤除去不溶的杂质，再用2 mol/L NaCl溶液溶解DNA 原理 方法 方案二 DNA对酶的耐受性 直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15 min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质 方案三 DNA对高温的耐受性 将滤液放在60～75 ℃的恒温水浴箱中保温10～15 min，注意严格控制温度范围，使蛋白质沉淀而DNA分子还未变性，可将DNA与蛋白质分离 　　3.如何区分DNA粗提取实验中部分操作的目的？ 加蒸馏水 ①加到鸡血细胞液，使血细胞吸水胀裂 ②加到含DNA的2 mol/L NaCl溶液，使DNA析出 用纱布过滤 ①过滤血细胞破裂液，提取细胞核物质(滤液) ②滤取0.14 mol/L NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物) ③过滤溶有DNA的2 mol/L NaCl溶液(滤液) 用NaCl溶液 ①加2 mol/L NaCl溶液，溶解提取的细胞核物质 ②(加蒸馏水)0.14 mol/L NaCl溶液使DNA析出 ③加2 mol/L NaCl溶液，溶解滤取的DNA黏稠物 ④用2 mol/L NaCl溶液，溶解丝状物用于鉴定DNA 　　4.什么是3′端和5′端？DNA复制为什么需要引物？ 　　为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端，而含磷酸基团的末端称为5′端；一个双链DNA分子中含2个3′端和2个5′端，如果一条链的方向是3′→5′，则另一条链的方向就是5′→3′，这就是反向平行的含意。 　　DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。PCR实验中，引物长度通常为20～30个核苷酸。 　　5.PCR实验中应注意哪些问题？如何进行PCR结果的分析与评价？ 　　 (1)PCR实验中的注意事项： 　　①避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前进行高压灭菌。 　　②缓冲液和酶分装成小份，-20 ℃低温保存。 　　③每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。 　　④混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。 　　(2)PCR结果的分析与评价： 　　①对于教材中的方法，可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果。 原理：DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关。 过程：稀释→对照调零→测定→计算。 　　②对于电泳检测的方法，可以通过在紫外线下直接观察DNA带的分布及粗细程度来评价扩增的效果。 　　③扩增不成功的可能原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。 　　6.分离血红蛋白的样品处理中，红细胞洗涤时为什么要低速短时间离心，并且要洗涤三次？ 　　红细胞洗涤时，洗涤次数、离心速度与离心时间十分重要。洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一起沉淀，达不到分离的效果。洗涤三次后，若上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白。 　　7.凝胶色谱柱的装填有什么要求？如何进行样品的加入和洗脱？ 　　在色谱柱中填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。一是在装填凝胶柱时，不能有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。二是在凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。一旦发生上述两种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。 　　滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，不要破坏凝胶面。在蛋白质分离过程中，仔细观察红色区带在洗脱过程中的移动情况，如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。根据红色区带的移动状况判断收集流出液时间，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL 收集一管，连续收集。 　　　　　　　DNA的粗提取与鉴定 　　下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中，所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是(　　) 试剂 操作 作用 A 柠檬酸钠溶液 与鸡血混合 防止DNA受损 B 蒸馏水 与