GB/T 29888-2013分枝杆菌菌种鉴定基因芯片检测基本要求.pdf

ICS 11.040.55 C 30 百目 中华人民共和 国 国彖标准 GB/T 29888—2013 分枝杆菌菌种鉴定基因芯片检测基本要求 General requirements of DNA array-based mycobacteria identification 2013-11-12 发布 2014-04-1 1 实施 GB/T 29888—2013 ■ i r ■ ■ i 刖 吕 本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草。 本标准由博奥生物有限公司和中国疾病预防控制中心提出。 本标准由全国生物芯片标准化技术委员会(SAC/TC 421)归口。 本标准起草单位:博奥生物有限公司 、中国疾病预防控制中心。 本标准主要起草人:郭永、祝令香、赵雁林、刘莹莹、王璨。 T GB/T 29888—2013 分枝杆菌菌种鉴定基因芯片检测基本要求 1范围 本标准规定了分枝杆菌菌种鉴定基因芯片检测的基本要求。 本标准适用于临床常见致病性分枝杆菌或临床常分离到的非致病性分枝杆菌的菌种鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 YY/T 1153 体外诊断用DNA微阵列芯片 YY/T 1154激光共聚焦扫描仪 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸； PCR：聚合酶链反应。 4原理 根据临床常见的分枝杆菌设计特异性的 PCR扩增引物及种属特异性寡核昔酸探针 。以临床样品 中分离的分枝杆菌DNA为模板，运用PCR技术进行扩增反应 。由于引物末端带有发光标记物，因此 在扩增过程中待检测的DNA分子被扩增为带有发光标记物的DNA片段。 将带有发光标记物的PCR扩增产物与芯片上的探针在一定的条件下进行杂交反应，根据碱基互补 配对原则，序列匹配的PCR扩增产物与探针形成稳定的二级结构 。根据结合了 PCR扩增产物的探针 在芯片上的特定位置排布，就可以推断岀相应被测细菌的相关信息，鉴定出被测细菌的种类。 5材料与试剂 5. 1仪器与材料 5.1.1微阵列芯片扫描仪:应符合YY/T 1154的要求并获得医疗器械注册证书。 5. 1.2微阵列芯片杂交盒。 5. 1.3核酸扩增仪。 5. 1.4芯片杂交仪（备选）。 5. 1.5芯片洗干仪（备选）。 5. 1.6微量加样器及加样器吸头。 5. 1.7恒温水浴锅。 5. 1.8微量离心机。 1 GB/T 29888—2013 5. 1.9离心管 （要求洁净无菌,PCR适用）。 5. 1. 10恒温摇床。 5. 1. 11洗涤的芯片容器及玻片架。 5.2试剂 5. 2.1分枝杆菌菌种鉴定试剂：一般包含芯片、盖片、PCR扩增试剂、阳性对照品、阴性对照品、杂交缓 冲液等组成部分，其中芯片应符合YY/T 1153的要求。 5.2.2冰水混合物。 5.2.3 水。 5.2.4临床样品液化试剂。 5.2.5缓冲液。 6样本采集与处理 6.