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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 金黄色葡萄球菌的鉴定 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌的鉴定 血浆凝固酶试验 分离培养：十六烷三甲基溴化铵培养基 生化反应： 氧化酶试验（＋） （培养物呈粉红色渐变为紫红色） 　　　　 绿脓菌素试验（＋） （盐酸溶液呈粉红色） 铜绿假单胞菌的鉴定 铜绿假单胞菌的鉴定 铜绿假单胞菌 溴化十六烷基三甲铵琼脂 菌种的相关知识 菌种是一个国家的重要资源，世界各国对菌种的保藏都极为重视。世界上有700多家菌菌种保藏机构，其中国际知识产权组织承认的法定的保藏机构仅有28家。 1、我国的微生物菌种保藏机构 1）普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC） 中科院微生物所，北京， 中科院武汉病毒研究所 2）农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC） 中国农业科学院土壤肥料研究所，北京 （ISF） 3）工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 中国食品发酵工业科学研究院，北京，（IFFI） 4）医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC） 中国医学科学院皮肤病研究所，南京 卫生部药品生物制品检定所，北京 中国医学科学院病毒研究所 5）抗生素菌种保藏管理中心（CACC） 中国医学科学学院抗生素研究所，北京 四川抗生素工业研究所，成都 华北制药厂抗生素研究所，石家庄 6）兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC） 农业部兽医药品检察所，北京 2、国外主要的微生物菌种保藏机构 1）美国标准菌种收藏所（ATCC） 2）美国冷泉港研究所（CSH） 3）日本东京大学应用微生物研究所（IAM） 4）日本东京科研化学有限公司（KCC） 5）日本大阪发酵研究所（IFO） 6）英国国立标准菌种收藏所（NCTC） 7）美国国立卫生研究所（NIH） 8）美国农业部北方开发利用研究部（NRRL） 我国的标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）管理，涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）提供 美国ATCC、NRRL，荷兰的CBS 中国医学菌种保藏中心提供的标准菌株 美国国家菌种保藏中心提供的标准菌株 菌种的采购 菌种的复苏 菌种的传代 菌种的使用 菌种的保藏 菌种的销毁 菌种的采购 向指定的菌种保藏机构购置。 所购菌种均为冷冻干燥菌种。 购入菌种后，应及时移交实验室。实验室菌种 管理人员应仔细核对菌种发放单和冷冻干燥菌种 管标签等各项信息，确认无误后，置4～6℃暂存。 菌种的复苏 菌种在打开前应仔细核对标签上菌名、菌号。 并注意一株菌种使用一套打开用具，严防交叉污染。 菌种复苏应在生物安全柜内操作。 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、可同时接种液体培养基和琼脂培养基斜面。 取琼脂培养基斜面上的菌苔按要求对菌种的纯度进行鉴定。 菌种的复苏 干燥菌种(安瓿)的开启 菌种的传代 应在生物安全柜中进行菌种的传代 。 美国药典（USP）中规定：“将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即称为一代，”并规定“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”。 我国的GMP认证中也如此要求，并且中国药典2005年版药典也已做出“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”这个明确的规定。 常用的传代方法 斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种 菌种的传代 斜面接种时的无菌操作 微生物的环境器皿及培养基的无菌 操作者的外界环境及操作过程的无菌（环境及操作的无菌） 划线接种  平板划线法（streak plate method） 菌种的使用 菌液的制备： 取铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中，置35～37℃细菌培养箱培养18 ～24h。 取上述液体培养物1ml，加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，分别10倍稀释至10-5～10-9，制成含菌数小100cfu/ml的溶液，备用。 菌悬液制备后应在2小时内使用，若保存在2～8℃的菌悬液可以在24小时内使用。 菌种的使用 铜绿假单胞菌相关： 因铜绿假单胞菌有运动性，因此在半固体培养基中穿刺培养后无法形成穿刺线。接种时，将半固体取出直接在培养基上涂布即可。 斜面保藏的菌种在冰箱中放置应注意控制温度，一般不宜低于4℃，也可以放置在室温中，但应控制温度不超过25 ℃。菌种保存过程中，会存在色素退化 的情况，此时对菌种进行传代培养，即可重新表现出色素，仍可使用。 菌种的保藏 保藏的方法：