实验三-细菌鉴定中的几种生化试验.ppt

实验三 细菌鉴定中常用的几种生化试验 内容 说明 现代快速生化检测 现代快速生化检测采用的方式： 简化试剂配制 简化操作过程 底物，指示剂、抑制剂的改良 操作、检测的高度自动化 1、掌握细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法； 2. 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌代谢类型的多样性； 3、了解细菌在不同培养基中的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 是一组试验； IMViC是靛基质试验或称吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、V-P试验（V）和柠檬酸盐利用试验（C）的缩写，i是为了发音的需要加上的； 常用于革兰氏阴性的肠道细菌检测中，可用于区分产气杆菌属和大肠杆菌属。 快速检测没有经典的定义，而是一种约定俗成的概念，概念讲的多了也就成为了定义， 以往文献对快速检测没有明确的时间规定 如果能够在10几分钟甚至几分钟内得到检测结果，可视其为比较理想的现场快速检测方法。 食品安全要得到保障，必须要有质量监督，质量监督离不开标准：质量标准和方法标准 科技发展，检测手段与方法多种多样，检测仪器越来越灵敏，检测限也越来越低。最快捷、最经济、最准确的检测技术是多方面都迫切需要的。 要快势必会损失准确度，或者提高成本。有得必有失，这门课讲教授如何找到平衡点 * * 用生化的方法来检测细菌对各种基质的代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类，这种生化试验称为细菌的生化反应试验；是鉴别细菌的重要依据 。 细菌的生化试验 常见的生 化 反 应 碳水化合物 代谢试验 碳源和氮源 利用试验 蛋白质和氨基 酸代谢试验 各种酶类试验 糖发酵试验 甲基红试验（MR） V-P试验 柠檬酸盐 利用试验 吲哚试验 硫化氢试验 IMViC 试验 硝酸还原酶试验， 淀粉水解试验 一、糖发酵试验 2、V-P试验 1、吲哚试验 三、淀粉水解试验 二、IMViC试验 3、MR试验 2、本次实验均按传统的生化试验方法进行检测 现代快速生化检测 1、本次细菌的生化试验仅选择5项代表性试验 4、自动化微生物鉴定系统 现代快速生化检测 1、显色培养基 3、快速检测试纸 2、生化鉴定管 海博金黄色葡萄球菌显色培养基 环凯沙门氏菌显色培养基 显色培养基 生化鉴定管 柠檬酸盐生化鉴定管 木糖生化鉴定管 大盒生化鉴定管 快速检测试纸 使用生化鉴定试剂盒对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌进行细菌鉴定。 全自动微生物鉴定系统 VITEK?全自动化微生物鉴定系统 [目的要求] 一、糖发酵试验 [实验原理] 根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。 各种糖 细菌 有机酸（乳酸、醋酸、丙酸等） 气体 （氢气，二氧化碳等） 产酸： 指示剂 （溴甲酚紫），由紫色（pH6.8以上)变为黄色（pH5.4以下) 产气 倒置的德汉氏小管 二、IMViC试验 1、吲哚（靛基质）试验 [原理] 色氨酸几乎存在所有蛋白质中，某些细菌如大肠杆菌等具有色氨酸酶。 蛋白胨中的色氨酸 色氨酸酶 靛基质（无色吲哚） 吲哚试剂 （对二甲基氨基苯甲醛） 玫瑰吲哚 （阳性反应） 2、V-P试验 [原理] 葡萄糖 丙酮酸 缩合 乙酰乳酸 脱羧 乙酰甲基甲醇 碱性条件 二乙酰 与培养基中精氨酸 的胍基结合 红色化合物（阳性反应） 3、MR试验 [原理] 葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 pH值降至4.5以下 培养基变红(阳性反应) 甲基红指示剂 非酸性末端产物(醇、醛等） pH值＞6.2 甲基红指示剂 培养基橘黄色(阴性反应) 淀粉 三、淀粉水解试验 [原理] 　检测细菌是否可以产生分泌到胞外的淀粉酶。 淀粉酶 糊精，双糖和单糖等 碘液 不出现蓝色反应，菌落周围呈现透明圈 蓝色 [实验材料] 培养基：葡萄糖发酵培养基，乳糖发酵培养基， 葡萄糖蛋白胨水培养基，蛋白胨水培养 基，固体淀粉培养基。 菌种：大肠杆菌，枯草杆菌，普通变形菌，产气 肠杆菌 试剂：卢戈氏碘液，甲基红指示剂，40%KOH， 5%α-萘酚，吲哚试剂，1.6%溴甲酚紫 仪器：略 [方法和步骤] 1、??试管（平板）标记 ? ? 葡萄糖发酵管 乳糖发酵管 吲哚试验管 V-P试验管 淀粉水解试验平板：4个 各 9支 用记号笔或者标签纸在平板底部划成或者区分为 2 部分 2、接种培养 试管接种：以无菌操