课件：三蛋白质化学.ppt

* （b）与甲醛的反应 （2）氨基酸的化学反应 一羟甲基衍生物 二羟甲基衍生物 甲醛测定法 测定游离氨基 或蛋白质的水解度 * （c）酰基化反应 酰氯： 苄氧羰酰氯（Cbz-Cl）: 对甲苯磺酰氯(Tos-Cl)or 5一二甲氨基萘-1-磺酰氯 (dansyl chloride, DNS): 叔丁氧酰氯(Boc-Cl): 酸酐： 邻苯二甲酸酐： （R’＝酰基） or * Cbz-Cl Cbz-氨基酸 举例1： 氨基酸与苄氧酰氯（Cbz-Cl）的反应 人工合成肽中保护氨基 * 氨基酸与 5一二甲氨基萘-1-磺酰氯（dansyl chloride, DNS）的反应 举例2： 测定微量AA 有荧光 * （d）烃基化反应 举例1：与2、4一二硝基氟苯的反应 2，4一二硝基氟苯 （R’＝烃基） * DNFB DNP-氨基酸（稳定、黄色） 肽链N端分析 * 桑格法(F.Sanger) O2N – F NO2 + H – NH – CHCO – NH – 肽链– COOH - HF R O2N – NO2 – NH – CHCO – NH – 肽链– COOH R HCl △ NO2 O2N – – NH – CHCOOH R + 其它各种氨基酸 此法的缺点是在水解时，整个肽链都被破坏、所以在肽链上只能进行一次N – 端分析。 * 举例2：与苯异硫氰酸（酯）的反应 PITC PTC-氨基酸 PTH-氨基酸 肽链N端分析 * 爱得曼（Edman)降解法 这种方法是瑞士化学家爱得曼于1950年提出来的，其优点是每次测定肽链的其余部分不受影响而被保留下来，这样又获得了一个新的N-端氨基。用同样的方法可确定下一个氨基酸组分。 * （e）脱氨反应 氨基酸经氧化剂或酶（AA氧化酶）的作用，脱氨产生酮酸。 是生物体内氨基酸分解代谢的重要方式之一。 * (f)成盐作用 R-CH-COOH+HCl R-CH-COOH NH2 NH2·HCl * （a）成酯和成盐反应 α-羧基参加的反应 * 酰化氨基酸 对硝基苯酚 酰化氨基酸对-硝基苯酯 （活化酯） （式中Y＝酰基） 人工合成肽 * （b）酰氯化反应 人工合成肽中和AA中的羧基活化。 * （c）成酰胺反应 体外： 体内： Asp + NH4 ATP 酶 Asn + Glu + NH4 ATP 酶 Gln + * （d）脱羧基反应 谷氨酸 γ-氨酸丁酸 胺 * （e）叠氮反应 人工合成肽中和AA中的羧基活化。 氨基酸 酰化氨基酸 酰化氨基酸甲酯 酰化氨基酸的肼衍生物 酰化氨基酸叠氮 * α-氨基和α-羧基共同参加的反应 茚三酮反应 脯氨酸和羟脯氨酸（黄） * PH5～7 茚三酮 此反应在分析氨基酸方法上极为重要，产生的蓝基色物质在570nm比色测定。 * （b）成肽键 肽键 * 侧链R基参加的主要反应 (a) -S-S-和-SH的氧化还原反应 保护AA的SH基不被破坏。 * 侧链R基参加的主要反应 (b) -S-S-和-SH的氧化还原反应 R-SH：HS-CH2CH2OH 巯基乙醇（mercaptoethanol） HS-CH2COOH 巯基乙酸（mercaptoacetic acid） HS-CH2(CHOH)2-CH2SH二硫苏糖醇（dithiothreitol, DTT） * 氨基酸重要化学反应见P89，表3-9 * 3.2.5　氨基酸分析分离 3.2.5.1 分配层析法的一般原理： 分配系数 Kd= CA CB CA：一种物质在A相（流动相）中的浓度 CB：一种物质在B相（固定相）中的浓度 　　主要根据被分析的样品（如aa混合物）在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的目的， * 纸层析法 氨基酸在纸上移动的速率称比移值或迁移率，以Rf符号代表。也就是原点到溶剂前沿的距离(Ds)同原点到层析斑点(即显色点）中心的距离（DA)的比值。 柱层析法 高效液相层析法 薄层层析法 * 离子交换反应 将氨基酸溶液通过装有离子交换剂的玻璃管进行离子交换后，再洗脱，则因各种氨基酸与离子交换剂的亲和力不同，被洗脱下来的氨甚酸的顺序必然不同，亲和力小的氨基酸先被洗脱下来。这样，就能使溶液中的各种氨基酿彼此打开。 近代分析和分离氨基酸的柱层析法就是根据这个原理设计的。 * 3.2.6 氨基酸的制备和用途 制备 水解蛋白质法 酸、碱或多种蛋白酶 酸水解可使色氨酸（Try）及部分羟基氨基酸破坏。 碱水解可使Cys-Cys、Cys、Arg破坏，引起AA的外消旋。 人工合成法