课件：二蛋白质的结构与功能.ppt

二、蛋白质的胶体性质 (二) 蛋白质胶体稳定的因素 颗粒表面电荷 水化膜 (一) 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。 应用：破坏两个稳定因素沉淀蛋白质 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚沉 三、蛋白质的变性、沉淀和凝固 1、概念 2. 变性的本质 即破坏非共价键，不改变蛋白质肽链的一级结构。 (一) 蛋白质的变性(denaturation) 3.导致变性的因素 如高温、高压、强酸、强碱、有机溶剂、重金属离子、生物碱试剂及辐射等因素。 4.临床应用 ①临床上利用加热或某些化学试剂使病原 微生物的蛋白质变性，从而达到消毒的 目的，如酒精、紫外线等消毒等 ②低温保存蛋白质制剂（如疫苗等）是防止 蛋白质变性。 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 5. 复性(renaturation) 若蛋白质变性程度较轻，去除 变性因素后，蛋白质仍可恢复 或部分恢复其原有的构象 和功能，称为复性。 HS SH SH HS HS SH HS HS 26 110 95 84 72 65 58 40 26 110 95 84 72 58 40 65 (二) 蛋白质沉淀 在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不一定变性。 蛋白质沉淀的方法： 条件： 临床应用：分离纯化蛋白质（不变性） 1、盐析： pH=pI 临床应用：低温分离蛋白质（不变性） （乙醇、乙醚） 2、有机溶剂： 条件： pH=pI 临床应用：制备无蛋白滤液 4、生物碱 （钨酸、苦味酸） 条件： pHpI 3、重金属盐 临床应用：用牛奶和蛋清抢救重金属中毒病人 条件： pHpI (三) 蛋白质的凝固作用 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸或强碱中。 四、蛋白质的紫外吸收 1、原因：由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸 2、波长：280nm 3、应用：蛋白质定量测定。 芳香族氨基酸的紫外吸收 240 250 260 270 280 290 300 310 光密度 色氨酸 酪氨酸 波长(nm) 五、蛋白质的呈色反应 (一) 茚三酮反应(ninhydrin reaction) 蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。 (二) 双缩脲反应(biuret reaction) 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。 (三) Folin-酚试剂反应 蛋白质分子中酪氨酸残基在碱性条件下能与酚试剂反应生成蓝色化合物。该反应的灵敏度比双缩脲反应高100倍。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * 1.肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。 2.两分子氨基酸缩合形成二肽，三分子氨基酸缩合则形成三肽…… (二)肽(peptide) 3.由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽，由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽。 4.肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基(residue)。 5.多肽链(polypeptide chain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。分别有： N 末端：多肽链中有自由氨基的一端， C 末端：多肽链中有自由羧基的一端。 +H3N Lys Glu Thr Ala Ala Ala Lys Phe Glu Arg 1 10 Gln His Met Asp Ser Ser Thr Ser Ala Ala Ser Ser Tyr Ser Asn Cys Asn Gln Leu Arg Pro Val Leu Val Asn Arg 30 Gln His Met Asp Gln Val Thr Ser Ala Ala Ser Asn Thr Ser Asn Cys Asn 20 Met Lys Lys Lys 40 Thr Val Glu 50 Asp Gln Cys Cys Cys Cys 60 Lys Ala Cys Cys Lys Asn Glu T