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电泳技术概论 内蒙古科技大学 基础生物实验教学示范中心 第一节 基本原理 迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度，可用下列公式计算： Ｕ =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/Vt Ｕ为迁移率（cm2·V-1·min-1）；υ为颗粒泳动速度（cm·s-1）；E为电场强度（V·cm-1）；d为颗粒泳动的距离（cm）；l为滤纸有效长度（cm）；V为实际电压（V）；t为通电时间（s或min）。通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。 1迁移率单位= 10-5 cm2·V-1·min-1 在确定的条件下，某物质的迁移率为常数，是该物质的化学特征常数 颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。 迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。 影响电泳速度的外界因素 1.电场强度 2 .溶液的pH值 3.溶液的离子强度 4.电渗现象 5.温度的影响 6.支持物的影响 影响电泳速度的外界因素1.电场强度 电场强度也称电位梯度，是指单位长度（每一厘米）支持物体上的电位降，它对泳动速度起着十分重要的作用。 一般，电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。 影响电泳速度的外界因素2．溶液的pH值 溶液的pH值决定了带电颗粒解离的程度，也决定了物质所带净电荷的多少。 影响电泳速度的外界因素3.溶液的离子强度 电泳液中的离子增加会使电泳迁移率降低，原因是带电的离子会吸引相反符号的离子聚集在其周围，相成一个与运动粒子符号相反的离子氛（ionic atmosphere），它使该离子向相反的方向运动，从而降低了该粒子的迁移率。 离子的这种阻碍效应是与其浓度和价数相关的。用离子强度来表示，它的数值如下式： 式中s表示共有s种离子，Ci和Zi分别代表每种离子的浓度（mol/L）和价数。 影响电泳速度的外界因素4.电渗现象 一个U形管的底部装上一块素烧瓷板（密封）管中装入液体，并在两端加入电极通电，就会看到负极的液面上升。因为瓷板带有负电荷，液体相对地带有正电荷，因而向负极移动。这种液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动，称为电渗现象。 影响电泳速度的外界因素5.温度的影响 电泳过程中由于通电产生焦耳热，热对电泳有很大的影响。 温度每升高1℃，迁移率约增加2.4%。为降低热效应对电泳的影响，可控制电压或电流，或在电泳系统中安装冷却散热装置 影响电泳速度的外界因素6.支持物的影响 对支持物的要求一般是均匀和吸附力小，否则电场强度不均匀，影响区带的分离，实验结果及扫描图谱无法重复。 第二节 电泳的分类 一、按分离原理分类 二、按有无固体支持物分类 电泳的分类一、按分离原理分类 　　　　区带电泳 　　　　移界电泳 　　　　等速电泳 　　　　聚焦电泳四种 电泳的分类二、按有无固体支持物分类 第三节?? 醋酸纤维素薄膜电 一、原理 　以醋酸纤维素薄膜为支持物。 二、材料和试剂 三、特点 特点： １?电泳后区带界限清晰； ?２通电时间较短； ３它对各种蛋白质几乎完全不吸附，因此无拖尾现象； ４灵敏度高，样品用量少。 ５对染料也没有吸附。 ６它的电渗作用虽高但很均一，不影响样品的分离效果。 醋酸纤维素膜电泳槽 第四节　琼脂（糖）凝胶电泳 　　　琼脂糖凝胶电泳主要用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等，为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段。 DNA分子大小与琼脂糖浓度的关系 核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 共价闭环cccDNA直线DNA开环的双链环状DNA 琼脂糖凝胶电泳的基本操作 １、配制缓冲液贮备液 ２、水平型琼脂糖凝胶制备 ３、样品的制备与点样 ４、电泳 ５、染色 ６、样品回收 第五节 丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法 PAGE应用广泛，可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量及少量的制备，还可测定分子量、等电点等 丙烯酰胺凝胶有以下优点： ①几乎无电渗作用。 ②化学性能稳定，与被分离物不起化学反应。对pH和温度变化较稳定。 ③在一定浓度范围内凝胶无色透明，有弹性，机械性能好，易观察。 ④凝胶孔径可调。 ⑤分辨率高，尤其在不连续不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体，因而有更高的分辨率。 一、丙烯酰胺凝胶聚