第五章聚合酶链式反应(PCR技术)..ppt

特点 遗传稳定性：SNPs是分布最广泛且稳定的点突变，SNPs具有更高的遗传稳定性，尤其是处于编码区的SNPs。 检测易于实现自动化：SNPs通常是一种双等位基因的遗传变异，有利于发展自动化筛选或检测SNPs。 单核苷酸多态性的类型与作用 位于基因编码区 同义变异 （synonymous） 错义变异 （missense） 无义变异 （nonsense） 提前终止 （stop codon）  单核苷酸多态性的类型与作用 续 位于非基因编码区或基因间隔区 基因剪接 （gene splicing） 转录调控 （transcript regulation） 非编码RNA （noncoding RNA）  遗传多态的医学意义和应用 连锁分析与基因定位 疾病的关联分析 复杂疾病或过程的基因定位 法医学应用: 个人识别， 亲权鉴定等 遗传多态的医学意义和应用 续 疾病发病的分子遗传机理的阐明 镰刀血红蛋白贫血 环境因子易感基因的检出 指导用药和药物设计 肝酯酶基因启动子区的一个多态与他汀类降血脂的效果有高度的相关性 （Zambon A, et al Circulation, 2001, 103(6) :792-798） 　 通常，重复单位16～28bp长，称为小卫星DNA。 重复单位2～6bp长，如（TA）n, (CGG)n等，称为微卫星DNA。　　DNA多态可以通过PCR扩增后电泳来检出，称扩增片段长度多态（amplified fragment length polymorphism, Amp-FLP） 数目变异串联重复，variable number tandem repeats, VNTR） PCR-VNTR检测 PCR-VNTR多态性检测 PCR；电泳检测 父’ 父 子 母 现 嫌1 嫌2 嫌3 双胞胎：首先是“抗体库基因差异”法。人生活在一定环境中，后天生活的环境一定会有所差异，人将随着环境形成自己特有的抗体库基因。“人体会针对不同的抗原，比如花粉、灰尘等，经过基因重排，产生不同的抗体。” 还可以采取“甲基化修饰差异”法。甲基化修饰广泛存在于人体细胞的基因组的各个片断，决定这个基因的表达情况。可以通过全基因组甲基化修饰情况扫描，在芯片技术的帮助下，基因位点的甲基化修饰情况就可以通过大量的光点明暗不同的方式表现出来。 其中一个DNA基因座出现了三带型嵌合突变，这种突变出现在受精卵首次分裂之后、胚层形成之前。在人群中出现的几率在万分之一左右。首次发现同卵双生子中VWA这个基因座的三带嵌合体突变。 植物遗传育种 构建遗传图谱、分离目的基因、基因定位、 分子标记辅助育种 了解不同品种间的亲缘关系、系统进化 畜 牧 畜禽病诊断:猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒、猪瘟病毒、牛白血病毒、牛病毒、性腹泻病毒、免疫缺陷病毒等检测 性别鉴定：牛、绵羊Y染色体上特异DNA片段 构建基因图谱 检测基因整合与表达：转基因鱼 植物保护 杀虫病原微生物的基因型鉴定 植物病原微生物分类 形态学上相似性和潜在的血清学交互反应，用常规方法难以区分，采用反转录PCR（RT-PCR）可准确快速区分 其 他 ①考古学 ②植物分类学 ③群体生态学 Molecular marker Introduction 形态标记、细胞学标记、生化标记 数十种技术问世。 万变不离其宗：分子杂交、PCR扩增 第一类：电泳、分子杂交为核心 代表：RFLP、DNA指纹 第二类：电泳、PCR为核心 代表：RAPD、SSR、AFLP 第三类：DNA序列为核心 代表：ITS测序分析 DNA多态 DNA多态（DNA Polymorphism）： 群体中每个个体（体细胞）的两套单倍体DNA是不完全相同的，一般每100～500bp就有一个是不相同的，它们多位于内含子序列中，表型并没有改变，这种表现称为DNA多态。常用做遗传分析中的标记。 除一卵双生子外，没有两个个体的基因组DNA是完全相同的。 优点 数量丰富、信息量大； 与生长发育无关，取材不受限制； 较多共显性，信息量完整 在真核生物中，基因组DNA多态性要远远多于各种基因的遗传多态性，因为基因组中存在着大量的不编码的DNA序列，它们的变异不受或较少地受自然选择的制约 Applications 种质资源研究 品质纯度鉴定（包括DNA指纹鉴定） 构建遗传连锁图 基因定位（QTL） 标记辅助选择 比较基因组研究 基因克隆（图位克隆） 生物起源、进化、医学及法医学 RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)