培养基成分及配制.ppt

生长素作用强弱顺序： 细胞分裂素作用强弱顺序 琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。新买来的琼脂最好先试一下它的凝固力。一般琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。 培养基的PH值 (pH value) 1、多数植物要求pH5.6-5.8 2、用0.1-1M的NaOH和0.1-1M的HCI调节. 3、注意：经高压灭菌后，培养基pH会下降0.2-0.8,固调整pH值时,应高于0.5；pH的大小会影响琼脂的凝固能力，当pH6.0时，培养基将会变硬，pH 5.0时，琼脂凝固不好。 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用mg/ml 或mg/L表示。 混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。 配制生长素类：可先用少量0.1N的NaOH或95%酒精助溶。浓度为：1-5mg／ml。 配制细胞分裂素类：一般先用少量0.5-1N盐酸加热溶解。浓度为：1-5mg／ml。 注意：母液配制时注意CaCL2等最后加入，防止沉淀 的产生。 含有结晶水的药品如MgSO4·7H2O、CaCL2·2H2O ，注意你所用的药品结晶水含量与配方药品上的是否一致，不一致要换算后才能加入。 配制好的母液瓶上应分别贴上标签，注明母液名称、配制倍数、日期及配1L培养基时应取的量。 每毫克的活性炭能吸附100ng左右的生长调节物质，这说明只需要极少量的活性炭就可以完全吸附培养基中的调节物质。 大量的活性炭加入会削弱琼脂的凝固能力，因此，在使用时要有其量的意识,使活性炭发挥其积极作用。它的颗粒大小决定着吸附能力：粒度越小，吸附能力越大；温度低吸附力强，温度高吸附力减弱，甚至不吸附。 * * 活性炭具有副作用，研究表示 基本培养基 ：MS、N6 、White等，只含有大量元素与微量元素和碳水化合物的培养基，称为基本培养基。 完全培养基： 基本培养基＋ 其它成分（激素、有机物质等），在基本培养基的基础上，添加各种各样的生长调节物质和其他有机附加物的培养基叫完全培养基。 第二节 培养基的制备 一、合适培养基的选择 合适培养基的选择；基本培养基；各种激素的浓度与配比 MS 培养基适合于大多数双子叶植物； B5和N6 培养基适合于许多单子叶植物； White 培养基适合于根的培养。 首先试用这些培养基进行初步实验，在基本培养基确定之后，进行不同种类激素浓度和激素间相互比例的配合试验。 * * 在植物组织培养工作中，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液。 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。 　一般母液配成比所需浓度高10-100倍。 　母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。 * * 二、母液的配制 母液的配制方法： * * 称 量 母液分装 确定培养基 溶 解 定 容 贴标签 保存于冰箱 (一)母液配制流程图 * * 一般母液配成比所需浓度高10-100倍。 母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有 机物和激素类等。 母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。 (二)母液配制要求(以MS为例) ： 具体要求： (1)大量元素母液 可配成浓度20倍母液。 (2)微量元素母液 可配成浓度1000倍的母液。 (3)铁盐母液 可配成100倍的母液， (4)有机物母液 可配成100倍的母液。 (5)激素母液的配制 每种激素必须单独配成母液，浓度一般配成1mg／ml。用时根据需要取用。因为激素用量较少，一次可配成50ml或100ml。 * * IAA、IBA、GA溶于少量的95％的酒精 加水定容； NAA 热水或少量95％的酒精 加水定容； 2,4-D可用少量1mol NaOH溶解 加水定容； Kt和BA 少量1mol的HCI中 加水定容； 玉米素 于少量95％的酒精 加热水到一定浓度。 * * 激素溶解方法： Ms母液（储备液）的配制与保存 成 分 用 量(g/l) 每升培养基取用量(ml) 母液1（大量元素 20×） NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O CaCL2.2H2O KH2PO4 母液2（微量元素 1000×） KI H3BO3 MnSO4.4H20 ZnSO4