弥漫大b细胞淋巴瘤微小残留病变的实验与临床研究及原发性中枢神经系统淋巴瘤临床分析-肿瘤学专业毕业论文.docx

中文摘要基因重排的表达量有关。实时荧光定量PCR(real—time 中文摘要 基因重排的表达量有关。实时荧光定量PCR(real—time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT—FQ—PCR)具有敏感性高，特异性 强，快速、微量、定量分析的优点，非常适合用于检测微小残留病变。在B-NHL， 染色体易位产生的融合基因和免疫球蛋白重链基因重排(immunoglobulin heavy—chain gene rearrangment，IgH—R)均可作为RT—FQ—PCR检测的靶分子。在 弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)因BCL一2／IgH易位 只占20％～30％，而BCL一6基因与IgH发生易位时的断裂点较分散，故使用IgH基因 重排作为靶分子检测较为合适。但是由于VDJ重排的多样性使每一个B细胞克隆有 它自己特异的DNA序列，即重排具有多样性，突变的存在，而且突变可发生在疾病 发展的不同时期，使得通用的引物和探针的设计成为困难。荧光染料标记的定量 PCR方法不需要合成探针，使应用RT—FQ—PCR检测DLBCL的微小残留病灶成为可能。 本研究采用简单、快速、敏感性和特异性较高的实时荧光定量PCR方法，采用 荧光染料技术，结合半巢式PCR(semi—nested PCR)方法，以IgH基因重排为标志， 对DLBCL患者治疗前后骨髓微小残留病变进行定量分析，结合临床特征，探讨荧光 染料标记的实时定量PCR方法检钡JJDLBCL微小残留病变的可行性和临床意义。 方法： 44例DLBCL患者的57份骨髓标本用于检钡J]IgH基因重排，10例非B细胞淋巴瘤的 骨髓做对照组，Namalwa细胞系作阳性对照，U一937细胞系作阴性对照。淋巴细胞 分离液分离骨髓单个核细胞，酚一氯仿一异戊醇抽提DNA，半巢式PCR和SYBR Green 荧光染料标记的实时荧光定量PCR方法分别检测IgH基因重排CDR III。2．5％琼脂 糖凝胶电泳检i贝JJPCR产物片断大小，B—actin作内参照，对IgH基因重排相对定量。 结果： 1．分析融解曲线可以确定IgH基因重排产物的特异性。荧光定量PCR和半巢式PCR 检测IgH基因重排的阳性率分别为63．2％和71．9％。两种方法均能在骨髓形态学阳 性的标本中检测到IgH基因重排，敏感性达到100％。在初治患者和复发难治患者 之间，IgH基因重排的阳性率两种方法均无统计学差异。 II 结论： 结论： 1．荧光染料标记的定量PCR方法结合半巢式PCR可用于弥漫大B细胞淋巴瘤的骨 髓微小残留病变的检测，荧光染料标记的定量PCR较半巢式PCR更好地反映 骨髓微小残留病变情况。+ 2．检测骨髓IgH基因重排，可以协助分期，I、II期患者检测到IgH基因重排不 能排除远处侵犯的可能。 3．动态观察IgH基因重排表达量，可以反映疾病变化过程，评价疗效。 4．未能确定检测微小残留病变在预测预后中的价值。 PCNSL的临床特征，评价大剂量氨甲蝶呤(HD．MTX)治疗PCNSL的疗效。并 PCNSL的临床特征，评价大剂量氨甲蝶呤(HD．MTX)治疗PCNSL的疗效。并 探讨半巢式PCR检测免疫球蛋白重链基因重排在协助分型和分期诊断中的意义 方法： 回顾性分析经病理证实的32例(ee位年龄50岁)PCNSL患者的临床资料和治 疗效果。2001年11月以前采用CHOP方案为主单用或联合全脑放疗的治疗方法， 2001年12月以后采用HD．MTX为主，单用或联合全脑放疗的治疗方法。半巢式 PCR检测患者石蜡组织和骨髓涂片IgH基因重排。 结果： 本组PCNSL患者45岁以上的占78．1％，颅内高压为主要表现占75％，单发 病灶占78．1％，未检测到脑脊液细胞学阳性病例，B细胞淋巴瘤占87．5％，弥漫 性大B细胞淋巴瘤59．4％。32例中位随访期17．5个月(1～84个月)，Kaplan—Meier 分析总中位生存期26个月，2年生存率52％：HD．MTX联合放疗组患者完全缓 解率64．7％，中位生存期在28个月以上，2年生存率66％，疗效明显优于非 HD—MTX联合放疗组；Log rank检验显示乳酸脱氢酶正常、活动状态(PS)评分 在O～l的患者生存期较长。Cox模型显示PS状况、LDH水平和治疗措施是PCNSL 的预后因素，PS越大、LDH水平越高，生存期越短，使用HDMTX+WBRT治疗， 患者生存期较长。 7例PCNSL中，5例检测到IgH基因重排(71．4％)。10例骨髓涂片标本，2 易基群博士学位论文 易基群博士学位论文 中文摘要 例见IgH基因重排条带。 结论： PCNS