几种商品化糖胺聚糖降解酶的克隆表达及其应用-生物工程专业论文.docx

分类号：Q81 分类号：Q81 单位代码：10422 密级： 学 号：201 21 1 721 ⑧以。磊，V办ERSITY孑 硕士学位论文 Thesis for Master Degree (专业学位) 论文题目： 几种商品化糖胺聚糖 降解酶的克隆表达及其应用 Clonin2。Expressmn andantl ApplicationApplication oI everal Commercial Glycosaminoglycan--Degradingnzymes 合作 导 师 201 5年5月 1 5 日 万方数据 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 叁旌 日 期： 21丛：．竖：2星 关于学位论文使用授权的声明 本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件 和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：一盘挎导师签名： 万方数据 山东大学硕士学位论文目录 山东大学硕士学位论文 目录 摘|耍 ．I ABSTRACT ． ．． III 符号说明 ．v 第一章前言 。1 1．糖胺聚糖及其降解酶 1 1．1糖胺聚糖 ．．1 1．2糖胺聚糖降解酶 一4 2．肝素副产物 5 3．抗血栓药物 6 4．本课题需要解决的问题 7 第二章HPND纯化相关酶类的表达及纯化 ．．9 1．材料 ．．9 1．1试剂 9 1．2仪器 9 2．实验方法 9 2．1 rHeparinase I、II、III的表达纯化 ．9 2．1．I rHeparinase I、II、III载体的构建 9 2．1．2 rHeparinase I、II、III的表达 ．10 2．1．3 rHeparinase I、II、III的纯化 ．10 2．1．4 rHeparinase I、II、III的活性检测 ．1 1 2．2硫酸软骨素酶ABC(CSase ABC)的制备 12 2．2．1 CSase ABC表达与纯化 ．1 2 2．2．2 CSase ABC活性检测 ．．1 4 2．3 rHCLase的克隆表达与纯化 ．14 3结果 ．．14 3．1 rHeparinase I、II、III的表达纯化 14 3．1．i rHeparinase I、II、III的表达载体的构建 ．14 3．1．2 rHeparinase I、II、III的表达 ．1 5 3．1．3 rHeparinase I、II、III产物分析及活性测定 ．18 3．2硫酸软骨素酶ABC(CSase ABC)的制备 ．22 3．2．1 CSase ABC的诱导表达和纯化 ．．22 万方数据 山东大学硕士学位论文3．2．2 山东大学硕士学位论文 3．2．2 CSase ABC活性检测 ．．23 3．3 rHCLase纯化 ．23 3．3．1 rHCLase的纯化 24 3．3．2 rHCLase的活力测定 ． ．．24 4讨论 ．25 5本章小结 ．．26 第三章HPND各组分的生物酶法纯化和舒络地特的仿制 ．27 1材料 ．．27 1．1试剂 ．27 1．2仪器 一27 2．方法 27 2．1 SLDX的仿制方案 ．27 2．2 SLDX的分析 ．28 2．2．1分子量分析 ．． 28 2．2．2二糖组成分析 ．．28 2-3 HPND中组分的纯化 ．30 2．3．1 HPND的生物酶处理 ．．30 2．3．2 HPND中组分的纯化 ．．30 2．3．3分子量分析 ．．31 2．3．4二糖组成分析 ．．3 1 2．4 HPND的分级沉淀 ．3 1 2．5 SLDX的仿制 ．3 1 2．5．1按分子量仿制 ．．3 l 2．5．2按二糖组成仿制 ．．3 1 3．结果分析 ．32 3．1 SLDX的分析 ．32 3．1．1 SLDX的分子量分析 32 3．1．2 SLDX的二糖组成分析 32 3．2生物酶纯化HPND中组分 33 3．2．1纯化HS／HP的二糖组成 ．34 3．2．2 HPND纯化前后分子量分析 ．．36 3．2．3 HS／HP各级分的二糖组成分析 ．．37 3．3 HPND分步乙醇沉淀 ．39 万方数据 山东大学硕士学位论文3．3．1不同乙醇沉淀分子量分析 山东大学硕士学位论