基因治疗腰椎间盘退变的实验研究-骨外科学专业论文.docx

中文攘要硬究背景；DDD是骨科医生几乎每天都要面对的躲床问题，其发生 中文攘要 硬究背景；DDD是骨科医生几乎每天都要面对的躲床问题，其发生 与DD密切相关。DD的原因多认与推问盘细胞的生物学特性和营养供应 障碍有关。如果能调节椎阚盘细塍豹生物学特性，促进退变雅闯盘豹髓核 和纤维环细魏分裂增殖，再生髓核内豹蛋自多藉和纤维环内的胶僚，就有 可照阻止DD发展，保持或恢复雄闯盘的生理视能。研究发现，生长因予 在发育、成熟及退变盘，椎问盘组织中，对稚厨盘细胞的生物学表现其有一 定的调节作用。施加生长因子于椎阕蠹细胞，毖促进细胞增殖和蛋自多糖 合成，显示应用生长霞予或通过{E进生砼因予在椎间盘内表达，诱导其细 胞再生和基质合成，有可能鼹止或者逆转DD。由于反复或者持续褴间盘 内绘入生长因子施行困难，存在感染等并发症风硷，有作者以腺病毒为载 体，将生长因子基因转染封成年兔髓核组织内，观察封髓核细胞合成生长 因子和蛋自多糟静餐妁有增灏，持续玎这12w，显示艨病毒载俸可以向稚 间壤缎织转移对其细照具有治疗作用羽生长曝予基因。具有一次性使用效 应持久、安全及副作用少的优点。因此．基因疗法损有希望成为治疗早期 DDD钓有效手段，改变传统治疗方法被动滞后的局面。但与正常推翻盘 不弱，退交稚蠲盘的细胞数量少，功熊不活跃， ：者细胞的生物学特性并 不一致，两藏述实验结累均来自正常撰勰盘缀织，退变椎婀盛的细臆齄否 被转絷，如筏转染，转染的效率、生长因子的表达东平及治疗效果如何， 均还是来知。如生长因子摹邈也鼗转染至退变椎闯盘，促进其细胞增殖及 基质合成，恢复永积蛋白多糖鼬含量，觚丽延缓DD进程，贼转基函按求 成为预防和早期治疗DDD方法妁可幸亍性，叉藏进了一步。 耳的：口造成兔矮榧稚闻失稳，诱导DD乃至DDD发磐。以摸索运 瑁基鼹治疗干预DD的其体时机，为进一步研究准备实验对象；舀掌拇 椎阍盘缨瑰的取材与培养技术，了解培养的稚闽盘细融的生物学特性及施 加IGFol对髓棱绍磨增殖和蛋自多耱合成的影魂，为进，涉在体瘫应用 IGF—l修复退变椎问盘提供实验依据，搏探讨髓核细胞作为髓核组织工程 种子细胞的可行性：口将携带人IGF-1基因的腺病毒载体注入兔退变推 间盘，硬察生长因子基因糍否放转染，转絷的效率及表达承平如何，髓否 促进细艉外錾矮合成，有无治疗效果，以验证基因治疗对在体退变椎闽盘 的作用和疗效。 材料与方法：u选用新西兰兔27}l，随机分为手术组15妊、对照 材料与方法：u选用新西兰兔27}l，随机分为手术组15妊、对照 组12只．手术组沿L，一6棘突{￡后正L}·切口，剥离骶棘飘和关节突附丽矾 肉，切除棘上、辣闻韧带及关蛰突关诲外后l趁：对照组作褶同皮肤切u 即缝合，分别于米聒2、4、8m对腰椎行X线、MRI、骨密度和组织学检 查，对x线、MRI和骨密度检查结果作计量分析，组织学检查行HE、 AB．PAS、Masson染色。0选用2m龄新西兰兔，处死后取出腰段脊柱和 膝关节半月板，分别取髓棱、纤维环和半月板软骨细胞，用含lO％FBs 的D砸wFl2培养摹培养，在倒置显微镜下观察二种细胞的生长情况， 行细胞计数，绘制牛跃lfli线；将1GF-1以不同浓度(O．1n∥ml、1．0ng／ml、 10ng／mI)佟_Hj于原代培养的髓核细胞，以MTT、”S掺入叛观察细胞增 殖及蟹n多耱合成情况；将第2代髓核细胞与脱钙骨材辩复合培养4811， 用扫描电镜观察髓梭纲胞的牛妖情况。口选用新匿兰兔40只。同前法造 成兔腰椎椎闻失稳，除外感染和恶病质4只，将其余兔随机分为腺病毒转 基因组16只、生长因子组8只、PBS对照组t2只，于术后4m经前方或 侧方入路二次手术，娃露k椎润盘，嚣组分翱滓入带入IGF-I基斟的重 组腙病毒载体(|07PFU)、IGF-l(2ng)和PBS，卡术币l、2、4、8周 行生化和组织学检矗，生化检套授Biitcr法测定髓核组缳中的蛋臼多糖含 量，组织学检查行髓、APAS、Masson发抗入lGF-l、抗胶原n免疫 缀他SABC法染色。 结果：0术螽2至8m，对照组腰椎未觅异常，手术组L3．6岿段财出 现一系列异常表现。术后2m，稚fBj舷髓棱组织T2像信号强度明显减低： 术后4m，麟椎早后凸畸形，椎体楔形样变，骨密度减低，软骨终板钙化 增多，髓核T2像信号进一步减低，有君突倾向，光镜下见髓核皱缩、裂 ：变，绌胞数景减少，酸性粘多糖减少，纤维环酸蹶变性，{iI现裂隙{术蛞 8m，椎体楔变和骨密度减低加重，所有椎问盘敬骨终板均钙化，多数榷 闯隙狭窄，髓核T1像信号减低，后突压迫谚g膜囊，链核内细胞少见，基 质分散崩解，纤维环破裂，有髓孩组织突入。统计学分析显示，手术组与 对照组鳓x线道变征象发生颓数和、软骨终扳钙纯、T2信号强度、骨密 度等朗