临五细胞与分子生物学实验.docx

20120423细胞与分子生物学实验教程期末复习总结（2011年10月）（by 张扬） 先喝口热翔 我 之所以写这份资料，也许为了给其他正在为准备这门实验课考试的同学提供一点点的帮助，更深层的意义也许是为了跟同学们交流学习方法，当然练习打字速度这个 目的我也承认。诚然，我不是学霸，但屌丝也有一颗高帅富的心，备胎也可以玩出个优雅，于是天亮了！这里，必须向大家做一下说明并表达一下歉意，因为这份资 料有很多空出的地方，而这些地方是没有答案的！要自己从书中找！而重点就是空出的那些部分。 到这儿，我听到同学们异口同声地说，坑爹啊！这个，这个嘛，童鞋请淡定，其实呢任何事物都是有利有弊的，这些坑儿既然被我挖出来必定都是可以填回去的，大 家只要稍稍翻一下书，就能找到正确答案了。而且仅仅总结的这些必然是不够的，我也希望大家在找答案的同时能顺便多翻翻书和课件，留有更多印象。真的碰到找 不到的答案也没有关系，必须是我设计时候存在的缺陷，这里就提前给跪舔了，求别说。最后一点，它的试用范围是临床医学五年制细胞与分子生物学实验课期末考 前的复习，临床八年或其他专业的同学也可以参考。考前给大家一点小提示：记住考试时带上白大褂哦亲。先实验，后笔试的。最后老毅丝都喜欢用一句意味深长的 话结尾：当考完试的你信步从容迈出考场，才懂得什么叫做没扔实验垃圾扣一分。 ? ? 教材来源：【人民卫生出版社】作者：卢健 所学内容： 第二章 ?实验一 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳① ?实验五 凝胶柱层析分离鉴定蛋白质② ?实验六 DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析③ ?实验十三 标准曲线法测定蛋白质含量④ ?实验十五 聚合酶链反应（PCR）与琼脂糖凝胶电泳⑤ ?实验二十二 显微镜使用⑥ ?实验二十五 蟾蜍血细胞的体外融合⑦ ?实验二十六 细胞有丝分裂及细胞骨架的显微观察⑧ ?实验二十七 动物染色体的制备⑨ 第三章 ?实验一 标准管法测定葡萄糖含量⑩ 第四章 ?实验一 高分子量DNA小鼠肝细胞DNA提取? ?实验二 AKP Km测定? ———————————————————————————— ??????????????????????????? ① 血清蛋白的等电点都在________以下，所以在pH8.6的巴比妥缓冲液以_______形式存在。 点样时点在醋酸纤维薄膜______光泽面，电泳时_____光泽面向下，所用染料为_____________ *（注：此符号代表不需要掌握只需要了解的内容，下同） *每条区带是否只代表一种蛋白质？ 否，因为条带的位置与蛋白质所带电荷Q，半径r有关，具有相近特性的蛋白质位置不易区分 *电场越高越好？ 否，电场强度过高，导致蛋白质在膜上电泳过程中温度升高，可能导致蛋白质在电泳过程中温度升高，可能导致蛋白质的变性从而影响实验结果 *条带带宽、颜色深浅、顺序与蛋白质的量、等电点、分子量的关系？ 电泳后条带带宽、颜色深浅与蛋白质的量有关，蛋白质的含量越大，条带越宽，颜色越深，而条带的顺序则与等电点与分子量有关，等电点越低，分子量越小，离点样线距离越远 —————————————————————————— ??????????????????????????? ② 以Folin-Denis反应检查流出液中蛋白质，主要靠蛋白质中的____________与___________________ 先出来的是相对分子质量_____的_______________ 比较脲酶活性所用试剂为________试剂 *向凝胶柱加入样品时，为什么必须保持胶面平整？上样体积为什么不能太大？ 因为如果胶面有斜面会导致起点位置的差异，从而层析出的结果受影响。而上样体积太大，样品内两种蛋白质分布不均匀也会影响层析结果 —————————————————————————— ??????????????????????????? ③ 双向聚酰胺薄膜层析的原理 ??? 聚酰胺上的酰胺基团与氨基酸形成________，各种氨基酸形成________能力的强弱不同，决定了_______ 的差异，__________________则展层速度___，____________________则展层速度___，各物质因此在聚酰胺薄膜上分离。 展层溶剂与被分离物质在_______表面竞争_________，被分离物质在_____与聚酰胺薄膜表面_______产生差异，___于展层溶剂的_________，不溶于________的______________ *本方法能否用于分离核苷及核苷酸，为什么？ 能，因为核苷与聚酰胺薄膜形成氢键能力较弱，但核苷酸可以，因为核苷酸多了磷酸基团，形成氢键的能力增强了。 *（背光为黄色的为重点，下同） 比移值Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 DN