海星质量标准建立及其提取物对成骨细胞影响-生物工程专业论文.docxVIP

专业学位硕士学位论文海星质量标准建立及其提取物对成骨细胞影响 专业学位硕士学位论文 海星质量标准建立及其提取物对成骨细胞影响 The establishment of starfish quality control and efI．ect of extracts on osteobIasts 学完成日期： 2Q!§生鱼月 大连理工大学 Daliall UniVersity of Tech0109y 万方数据 m0Im0II舯I啪㈣00籼mmIY2822072 m0Im0II舯I啪㈣00籼mmI Y2822072 大连理工大学学位论文独创性声明 作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究 工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外， 本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请 学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献 均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 学位论文题目：魈逊垒墓逝趁煎逝趁!盈若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 作者签名 幽 曰期：—丝年—生月上堑日 万方数据 大连理工大学专业学位硕士学位论文摘 大连理工大学专业学位硕士学位论文 摘 要 海星是传统的民间中草药，最开始记载于《本草纲目》。其中，关于海星质量标准 的研究参差不齐，仅限于性状鉴别，未见显微鉴别、通识项检查及有效成分含量测定等。 海星己作为伤科接骨片的君药用于治疗骨伤愈合等，但关于海星对成骨细胞增殖分化活 性研究较少，未见海星中活性成分对成骨细胞增殖分化的影响。因此，本论文进行了以 下几个方面的实验： 1)以中国药典2010版为标准，建立海星质量标准。通过显微鉴别观察其特征为： 横纹肌纤维有明暗相间的细密横纹，横纹平直或呈微波状，呈现长卵圆形，表面可以看 见有细点或裂缝状空隙；骨碎片呈现不规则形；皮肤碎片表面界限不分明，可看到有棕 色颗粒色素物质；胶原纤维相互缠绕成团。通过对通识项(水分、总灰分、浸出物含量) 检查及海星中多糖、皂苷含量的测定，建立质量标准为水分含量不高于8．0％，总灰分 含量不高于60％，水溶性浸出物含量不低于16％，70％醇溶性浸出物含量不低于10％。 海星中多糖的含量不低于2．45％，皂苷的含量不低于1．33％。 2)通过稀酸法和酶提法相结合的方式，从海星中分离出了多糖，并经过sevag法脱 蛋白、透析、双氧水脱色等方法得到多糖粗品，为浅黄色粉末。测得其中糖含量为37．62％， 蛋白含量为3．22％，S042’含量是14．70％。经过Molish反应和Seliwanoff反应确定多糖 中含有醛糖残基，不含酮糖。 3)采用70％乙醇反复提取方法，经过石油醚脱脂、水饱和正丁醇萃取、丙酮沉淀 以及大孔吸附树脂层析，从海星中制得皂苷粗品。经泡沫反应、酸碱泡沫反应、a．萘酚 反应、三氯乙酸．氯仿反应、氯仿．浓硫酸反应、醋酐．硫酸反应确定提取的海星皂苷是甾 体皂苷，可能含有硫酸基。通过香草醛．高氯酸法确定最佳吸收波长是547Im，测得皂 苷含量为32．32％。 4)通过贴壁组织块酶消化法分离、培养，差速贴壁法纯化得到原代成骨细胞。不 同浓度多糖、皂苷提取物作用于原代成骨细胞后，MTT法检测细胞增殖、测定ALP活 性、茜素红染色、定量检测矿化结节形成。实验证明，海星中多糖、皂苷提取物对成骨 具有增殖作用，通过增加ALP的活性、促进骨基质矿化形成，促进成骨细胞的增殖、 分化。 综上所述，本课题对海星的质量标准进行了提高和完善，为更好的控制海星的质 量标准提供了依据和方法；且海星中提取的多糖、皂苷提取物对成骨细胞具有增殖分化 作用，为海星资源的开发利用提供了科学依据。 关键词：海星；质量标准；提取物；原代成骨细胞；影响 万方数据 海星质量标准建立及对成骨细胞增殖分化影响The 海星质量标准建立及对成骨细胞增殖分化影响 The establishment of starfish quali够control and ef-fect of extracts on osteoblasts Abstract Sta|msh is a traditional C11inese medicine，first recorded i11 Compendi啪of Materia Medica． ReseaI℃h on the quali坶 control of s锄sh varies， aIld limited in cha“屺ter identification．There is no microscopic identification，general test aJld detemlination of active ing：redien