光谱法分析喹诺酮类药物与蛋白质的相互作用-化学 有机化学专业论文.docxVIP

张霞 张霞 兰州大学硕士学位论文 2008 药物与蛋白质的相互作用研究 摘 要 药物小分子与生物大分子蛋白质相互作用的研究是化学生物学的重要研究 内容。目前研究较为广泛地是血清蛋白与药物小分子的相互作用。其中人血清白 蛋白是体内最重要的转运蛋白质，能和许多内源和外源性的物质如代谢物、药物 和其它具有生物活性的化合物结合，起到存储和转运作用。因此对药物等小分子 与人血清白蛋白的相互作用的研究有助于理解药物的分配、传输、代谢和功效， 以及药物分子结构与药效之间关系提供了有利的信息。溶菌酶是一种球状蛋白 质，具有水解细菌细胞壁杀死细菌的作用。过氧化氢酶是一种重要的抗氧化剂， 它能把过氧化氢分子氧化分解为水和氧气。溶菌酶和过氧化氢酶像血清蛋白一样 也能和许多小分子物质如药物结合，从而对药物的代谢和功效以及酶的活性等产 生影响。该领域己成为从事生命科学、化学和临床病理学科研工作者共同关注的 课题之一。随着分子生物学及各种仪器技术的发展，使得小分子与生物大分子相 互作用的研究这一领域有了很大的发展。许多以前不能进行该领域研究的方法也 开始在蛋白质与小分子药物研究中发挥重要作用。本论文基于开展小分子与蛋白 质相互作用的重要意义及国内外研究趋势，在前人工作的基础上，主要进行了以 下几方面的创新性研究： 1．综合利用荧光光谱、紫外一可见吸收光谱和圆二色谱等多种方法相结合研 究了药物小分子(甲磺酸帕珠沙星和刚果红)与几种蛋白质(人血清白蛋白、溶 菌酶和过氧化氢酶)的相互作用，获得了准确一致的信息。 2．根据Stem-volmer方程和Van’t Hoff方程等研究了药物小分子与蛋白质结 合的作用机理(包括荧光猝灭机理、结合常数、结合位点数和结合力)，并且计 算了结合距离，讨论了主要作用力类型。 3．探讨了利用同步荧光光谱法研究甲磺酸帕珠沙星与几种蛋白质相互作用 的原因，根据荧光偏振方法研究了甲磺酸帕珠沙星与过氧化氢酶的作用机理。利 用三维荧光光谱确定了溶菌酶和刚果红的最佳激发波长，运用共振光散射荧光技 术探讨了刚果红诱导溶菌酶周围微环境的变化。 4．利用圆二色谱法考察了药物小分子对蛋白质二级结构的影响。 张霞 张霞 兰州大学硕士学位论文 2008 论文共分为四部分： 第一章：简要介绍了蛋白质的结构、功能和性质：综述了药物与蛋白质相互 作用的研究方法以及研究现状等。 第二章：利用同步荧光光谱、紫外．可见吸收光谱和圆二色谱研究了模拟生 理条件下甲磺酸帕珠沙星与人血清白蛋白和溶菌酶的相互作用。实验结果表明， 甲磺酸帕珠沙星通过结合机理猝灭人血清白蛋白和溶菌酶的内在荧光，计算了不 同温度下药物与人血清白蛋白和溶菌酶相互作用的结合常数及位点数，分析了药 物对人血清白蛋白和溶菌酶二级结构的影响，并根据热力学参数确定了作用力类 型。 第三章：利用同步荧光光谱、荧光偏振和圆二色谱研究了模拟生理条件下甲 磺酸帕珠沙星与过氧化氢酶相互作用前后自身同步荧光强度以及各向异性值的 变化。计算了不同温度下甲磺酸帕珠沙星与过氧化氢酶相互作用的结合常数及位 点数，探讨了药物的结合对过氧化氢酶构象产生的影响。热力学分析可知，药物 与过氧化氢酶之间主要是以氢键和静电作用力为主。 第四章：利用三维荧光光谱、发射荧光光谱、共振光散射荧光光谱和圆二色 谱研究了模拟生理条件下刚果红与溶菌酶的相互作用。三维荧光光谱确定了溶菌 酶和刚果红的最佳激发波长分别为280和320nto。刚果红以静态和动态猝灭机理 猝灭溶菌酶的内在荧光。热力学参数显示主要是疏水作用力存在于相互作用过程 中。圆二色光谱表明刚果红使溶菌酶的二级结构发生变化。另外，共振光散射荧 光光谱数据也表明了刚果红诱导溶菌酶周围微环境的改变。 关键词：甲磺酸帕珠沙星，刚果红，人血清白蛋白，溶菌酶，过氧化氢酶，荧光 猝灭，圆二色光谱，构象。 H 张霞 张霞 兰州大学硕士学位论文 2008 Abstract The interactions between drugs and biological molecule have been important for chemistry biology investigation．Now,the interactions between protein and drug have been widely studied in this field．Thereinto，Human serum albumin(HsA)is the most abundant carrier protein in blood circulation,which can bind many endogenous and exogenous substances