课件：基因符号概述.ppt

3 中间培养 让变异处理后细胞在液体培养基中培养几小时，以让细胞的遗传物质复制，让细胞繁殖几代，以得到纯的变异细胞。 若不经液体培养基的中间培养，直接在平皿上分离就会出现变异和不变异细胞同时存在于一个菌落内的可能，形成混杂菌落，以致造成筛选结果的不稳定和将来的菌株退化。 筛选分初筛和复筛。初筛以迅速筛出大量的达到初步要求的分离菌落为目的，以量为主。 复筛则是精选，以质为主，也就是以精确度为主。因此在具体方法上就有差异. 二 高产菌株筛选 初筛一般通过平板稀释法获得单个菌落，然后对各个菌落进行有关性状的初步测定，从中选出具有优良性状的菌落。例如，对抗生素产生菌来说，选出抑菌圈大的菌落；对于蛋白酶产生菌来说，选出透明圈大的菌落。此法快速、简便，结果直观性强。缺点是培养皿的培养条件与三角瓶、发酵罐的培养条件相差大，两者结果常不一致。 复筛指对初筛出的菌株的有关性状作精确的定量测定。一般要在摇瓶或台式发酵罐中进行培养，经过精细的分析测定，得出准确的数据。 变异菌株的初步筛选 透明圈法 琼脂块培养法 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析 * 即淘汰野生型 例：青霉素法，适合于细菌。 青霉素能抑制细菌细胞壁的合成，能杀死生长着的细菌，对休止态细胞无作用。 * * -----“复制后修复”（post-replication repair）因为它们在复制后起作用，也称为“重组修复”（recombination-repair）。此系统在处理复制含有损伤碱基模板后产生的子代二倍体的缺陷中起作用 重组酶：recA, recB, recC(染色体交换) ----- 重组修复中原损伤没有除去，但若干代后可逐渐稀释，消除其影响。所需要的酶包括与重组及修复合成有关的酶，如重组蛋白A、B、C及DNA聚合酶、连接酶等 （三）重组修复 （四）SOS系统 许多损伤DNA或抑制大肠杆菌复制的手段引起一系列综合的表现型改变，称为SOS反应。这是由RecA蛋白和LexA抑制物相互作用而引起的。 SOS反应表现为修复损伤DNA的能力增强, 这是通过诱导修复系统和RecA重组修复系统组分的合成来实现的。 Insertions ATGAAAGAG.... ATGGAG.... Possible results a. amino acids or polypeptides can be gained. b. frameshifts can occur (see below) One or more base pairs are gained TB 嵌合剂引起移码突变： ICR191,5-氨基吖啶，吖啶橙，原黄素. 为平面三环化合物，可插入二个碱基对中间，使得原来的相邻的碱基相互分离， 这种DNA分子在复制过程中很容易插入1-2 个碱基，从而引起移码突变。 吖啶橙插入到两对碱基之间 Frameshift mutations(移码突变) ATGCAAGTTG.... one base pair deletion Insertions or deletions that change the translational frame Two changes in polypeptides are possible: (1) every amino acid downstream of the mutation is changed, (2) a truncated (shortened) protein is produced. ATGAAGTTG.... TB 野生型DNA 部分单链消失 突环形成 修补合成 CA错配的产生 ★营养缺陷型诱变筛选步骤及方法 营养缺陷型浓缩 营养缺陷型检出 营养缺陷型鉴定 1营养缺陷型浓缩 1）抗生素法：野生型能在MM中生长，而缺陷型不能，于是将诱变处理液在MM中培养短时让野生型生长，处于活化阶段，而缺陷型无法生长，仍处于休眠状态。 -----由于野生细菌或酵母对一些抗生素敏感，于是就相应加入一定量的抗生素，结果活化状态的野生型就被杀死，保存了缺陷型。一般细菌可以采用青霉素，酵母可采用制霉菌素。 抗生素法 原理： 青霉素、制霉菌素等抗生素作用于生长着的微生物细胞，对休止态细胞无作用。 方法：将菌培养在含抗生素的MM基中 原养型 营养缺陷型 2）菌丝过滤法： -----适用于进行丝状生长的真菌和放线菌。 -----其原理是：在基本培养基中，野生型菌株的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能。通过过滤就可除去大部分野生型，保留下营养缺陷型。 菌丝过滤法 适用于：丝状（放线菌、霉菌） 原理：基本培养基上只有发育成菌丝；auxo孢子可通