课件：分子生物学遗传病基因诊断和治疗.ppt

多耐药基因 (MDRl)编码P糖蛋白的跨膜蛋白，它有抗肿瘤药物位点和 ATP位点2个结合位点，通过ATP供能可将细胞内药物泵出 从而保护正常细胞免受药物损害。 目前，肿瘤耐药基因治疗的方案是转 入MDRI基因、DHFR基因、MGMT基因等，或者联合使用2 种或多种耐药基因转入造血干细胞，使造血干细胞获得广谱抗 药性。 自杀基因疗法 自杀基因疗法又称为病毒导向的酶解前药疗法 其原理是将一些病毒或细菌基因组中的前 药转换酶基因（也叫自杀基因)导入肿瘤细胞，该基因 编码特殊的酶可将原先对高等动物无毒性的前药在 肿瘤细胞中代谢为毒性产物，从而引起这些细胞自 杀。 其作用是：促进免 疫效应细胞的分化增殖、加强对肿瘤的杀伤力；直接杀伤癌细 胞；增加肿瘤细胞的免疫原性。 基因联合治疗 由于肿瘤是多因素、多环节、多阶段的复杂疾病，依靠单一 方法并不能达到理想的抗肿瘤效果，因此多种治疗联合、针对 肿瘤的不同特征进行治疗已经成为基因治疗发展的一个趋势。 促细胞凋亡的基因疗法 定义： 通过人为手段改变肿瘤细胞的某些相关基因来使其尽早启动凋亡程序，达到消灭肿瘤细胞的目的。 分类：促细胞凋亡的基因治疗主要包括通过反义核酸技术抑制凋亡抑制基因以及向癌细胞导入凋亡活化基因两种方式。 一、通过反义核酸技术抑制凋亡抑制基因： Tietze用表达核转录因子的抑制子封闭KappaB的活性，使TNh介导的凋亡明显增加。 由于Survivin是凋亡抑制剂，可用其反义基因腺病毒载体治疗直肠癌模型，使癌细胞凋亡明显增加，并使化疗药物敏感性上升 促细胞凋亡的基因疗法 向癌细胞导入凋亡活化基因： 还有研究将VEGFR 2细胞外区、跨膜区与Fas受体的胞质区联合在一起形成复合受体VEGFR2 Fas，作为VEGF触发的死亡受体，用VEGF治疗可迅速导致细胞凋亡，VEGFR2 Fas可有效地将VEGF的作用逆转，发挥抗肿瘤的作用。 Fas和TNF均可诱导凋亡，用腺病毒载体输送Fas配体GFP融合蛋白和TNF凋亡相关诱导配体转染脑膜瘤细胞可使凋亡水平明显升高。 还有其他利用端粒酶、IFN7、p53、IL24基因等进行的诱发凋亡的治疗。 抑制细胞信号传导道路 定义： 抑制细胞信号传导道路通过抑制细胞信号传导道路可抑制肿瘤细胞的增殖。 信号传导道路中酪氨酸激酶与肿瘤的发生、发展有关，主要有EG-FR、VEGFR、DDGFR、Scr、Bcr、Abl等。 如：Kim等采用表达c met核酶的腺病毒载体转染前列腺癌细胞时发现，Scr激酶活性明显下降，并认为靶向C met信号通路的治疗对于控制前列腺癌生长和转移有重要意义。 还有研究采用EGFR反义RNA治疗胶质瘤也取得明显疗效。 Bookout等通过抑制前列腺癌G蛋白信号传导道路而使肿瘤细胞死亡。 THANK YOU~ 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析 * * 基本策略和常用方法 基本策略 (一)治疗性基因的获得 (二)基因载体的选择 (三)靶细胞的选择 (四)基因转移方法 (五)转导细胞的选择鉴定 (六)回输体内 （一）目的基因的选择和制备 基因治疗的首要问题是选择用于治疗疾病的目的基因。 要求：在体内仅有少量的表达就可显著改善症状；该基因的过高表达不会对机体造成危害。 在抗病毒和病原体的基因治疗中。所选择的靶基因应在病毒和病原体的生活史和起重要的作用并且该序列是特异的。 　制备目的基因：正向表达的基因可以是cDNA（complementary DNA），也可是基因组DNA(genomic DNA)片段。可用传统的方法（人工合成）获取，也可采用多聚酶链式反应(polymerase chain reaction PCR)等新技术进行体外扩增。部分反义基因也可采用此法获得，但多数情况下采用人工合成的方式制备。 （二）基因的转运　　目前已有多种基因转运的方式，其基本原则是将外源基因运到细胞内。已使用的有病毒载体和非病毒载体两大类。 病毒载体： 病毒具有一些独特的性质如多数病毒可感染特异的细胞，在细胞内不易降解；RNA病毒能整合到染色体以及基因水平较高等。因此病毒载体是良好的基因转运载体。目前已被用作载体的病毒有逆转录病毒、腺病毒、腺相关的病毒。疱疹病毒和肝炎病毒等。 【逆转录病毒用作载体时需进行几步改造 （1）将天然的野生型RNA前病毒转变成DNA载体，并插入欲转移的相关外源基因。其基本原则是用标记基因和外源基因替代病毒的编码基因示。 （2）制备辅助细胞为载体DNA提供其丧失的功能。 （3）将载体DNA导入