课件：第十章白细胞检验的基本方法.ppt

（一）荧光免疫法检测 【原理】 受检血清中的抗体和粒细胞结合后，加标记荧光物质的羊抗人 IgG血清，可使粒细胞膜显示荧光，然后在荧光显微镜下观察阳性比率和荧光强度。 【结果】 阳性反应表示受检血清中存在粒细胞抗体。 【临床评价】 本法敏感性较好，特异性强，临床上常作为确诊免疫性粒细胞减少症的方法。 下一页 第三节 （二）化学发光法检测 【原理】 用化学发光技术测定单个核细胞与抗体被覆的粒细胞相互作用产生的代谢反应，间接测定抗粒细胞抗体。 【结果】 用发光仪测定增强的化学发光反应，用发光指数表示结果。 【临床评价】 本法比间接荧光免疫法更灵敏，可用于确诊免疫性粒细胞减少症。 上一页 下一页 第三节 （三）流式细胞技术检测 【原理】 采用正常人“O”型抗凝血分离出单核细胞和粒细胞，经1％多聚甲醛固定，二者再等量混合制成细胞悬液，加受检血清孵育，再加结合异硫氰酸荧光素（FITC）和抗人F（ab）2IgG，采用流式细胞分析仪进行分析来检测同种反应性粒细胞抗体。 【结果】 荧光强度与粒细胞抗体量呈线性关系，根据荧光强度的大小即可得出粒细胞抗体的量。 【临床评价】 本法不但可对粒细胞抗体作半定量测定，还可以对抗体类型进行分析，以确定是否存在免疫复合物。 上一页 返回 第三节 【原理】 分离的粒细胞并在培养过程中加入 PHA或特异性抗原刺激后，进人有丝分裂期，此时加入3H-TdR，可被细胞摄入参与DNA合成，其掺入量与DNA合成的量以及增殖细胞数成正比，用液体闪烁计数器测定3H-TdR的掺入量，即可判定粒细胞的增殖水平。 【参考值】 SI＜2 下一页 第三节 【临床评价】在正常情况下，体内粒细胞在增殖池（骨髓）、循环池（血液）及边缘池（组织）之间处于平衡状态，末梢血中成熟粒细胞数为（2.5－5. 5）× 109／L。在罹患血液等病理情况下，这种平衡状态受到不同程度的破坏，即可能出现异常。 研究白血病细胞动力学时给急性白血病患者连续静脉输人3H-TdR，8－10天后观察到仍有8％－10％的白血病细胞未被标记，这一小部分白血病细胞增殖相当缓慢。说明白血病细胞是一群非同步化增殖的细胞。 上一页 第三节 返回 【原理】 正常时骨髓中粒细胞储备量大于外周血中的10－15倍，泼尼松具有刺激骨髓中性粒细胞由储备池向外周血释放的功能。如果受检者骨髓的粒细胞储备池正常，服用泼尼松后经过一定时间储备池大量释放至血流而使外周血中性粒细胞的绝对值明显增高。反之，则无此作用或作用不明显。可间接测定骨髓粒细胞池粒细胞的储备功能。 【参考值】 服药后中性粒细胞最高绝对值＞20×109／L（服药后5小时为中性粒细胞上升到高峰的时间） 下一页 第三节 【临床评价】 泼尼松试验可反应骨髓中性粒细胞储备池的容量。中性粒细胞减少患者，如服用泼尼松后外周血中性粒细胞最高绝对值＞20×109／L，表明患者中性粒细胞的储备池正常，粒细胞减少可能是由于骨髓释放障碍或其他因素所致。这对于某些骨髓受损引起粒细胞减少的轻微病例有一定参考及诊断价值。反之，则反映储备不足。 上一页 第三节 返回 【原理】 白细胞（主要是指中性粒细胞）进入血流后，约半数进入循环池，半数粘附于血管壁成为边缘池的组成成分。此部分白细胞在外周血白细胞计数中不能得到反映。注射肾上腺素后血管收缩，粘附于血管壁上的白细胞脱落，从边缘池进入循环池，致外用血白细胞数增高，其作用持续时间为20－30分钟。分别在注射前和注射后20分钟取血，计数中性粒细胞数。 下一页 第三节 【参考值】 粒细胞上升值一般低于（1.5－2）×109／L 【临床意义】 白细胞减少者，注射肾上腺素后，如外周血白细胞能较注射前增加 1倍以上或粒细胞上升值超过（1. 5－2）×109／L，表示患者白细胞在血管壁粘附增多，提示病人粒细胞分布异常，即边缘池粒细胞增多，如无牌大，可考虑为“假性”粒细胞减少。如果增高低于上述值，则应进行其他检查，进一步确定白细胞减少的病因。 上一页 第三节 返回 【原理】 二异丙酯氟磷酸盐标记（DF32P）是利用含有放射性磷的二异丙酯氟磷酸作为胆碱酯酶的抑制剂，与细胞上的胆碱酯酶结合，即使细胞崩解，也不再与其他细胞相结合。故对测定血液循环中细胞池的大小（pool size）以及滞留的时间均非常方便。用于粒细胞动力学研究时，一旦采血制成离体