应用EP7-A2文件对无机磷测定的干扰评价.doc

赵笔辉 E-mail HYPERLINK mailto139.com139.com 联系电话 应用EP7-A2文件对无机磷测定的干扰评价 赵笔辉（浙江省宁波市北仑区人民医院检验科，宁波 315806） 【摘要】 目的 对紫外直接法测定血清无机磷进行抗干扰评价，深入完整的掌握CLSI制订的EP7-A2文件。 方法 依据EP7-A2文件要求的“配对-差异”实验对干扰物进行筛选、确认。若确定该物质产生干扰则进一步利用“剂量-效应”实验对干扰物浓度与干扰程度之间的关系进行分析。 结果 溶血干扰：为负干扰，相关系数R2=0.9988，回归方程为y=-0.3944x-0.018；黄疸干扰：为负干扰，相关系数R2=0.9998，回归方程为y=-0.0045x+0.0344；脂浊干扰：为正干扰，相关系数R2=0.9936，回归方程为y=0.0793x+0.0687。 结论 设置了双波长的紫外直接法无法消除溶血、黄疸、脂浊等因素的严重干扰，建议对受干扰的标本进行血清+1试剂空白（对于单试剂的检测应采取血清+无主反应物的试剂空白），以消除干扰物光吸收本底的影响。。 【关健词】 无机磷；紫外直接法；干扰实验；配对-差异；剂量-效应 中图分类号：R446.1 血清无机磷测定属生化常规项目，是离子测定的重要组成部分，在临床上应用较为广泛。目前其测定方法有磷钼酸法（紫外分光光度法）[1]、钼蓝法、干化学法等，其中紫外分光光度法是最为常用的血清无机磷测定方法，且其测定所用的国内各试剂一般均为单试剂。在自动生化仪上反应快速无法读取空白吸光度，受到溶血、黄疸、脂浊等因素的严重干扰。以往工作者只意识到干扰的存在，而本研究通过应用美国临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）制定的评价方案中的EP7-A2文件的标准化操作[2]，对上述干扰情况作一详细的评价。 材料与方法 实验材料 1．仪器：OLYMPUS AU640全自动生化分析仪(日本奥林帕斯公司)。 2．试剂：无机磷试剂盒(紫外直接法),批由上海科华生物工程股份有限公司生产。试剂盒的主要成：硫酸220 mmol/L，钼酸铵1.00 mmol/L，表面活性剂适量。 校准品：C.f.a.s多项校准品由罗氏公司提供（用于做室内质控和各项试验之前校准仪器）。 室内质控品：由浙江省临床检验中心和由美国贝克曼公司（BECKMAN）提供。 方法 1．无机磷项目测定主要参数：测定方法选择一点终点法，测光点16，主/副波长340 nm/410 nm，样本/试剂量4 μl/200 μl。 2．标本溶血模型的制备（血红蛋白储存液）： 参考EP7-A2标准程序，取新鲜无溶血、无黄疸、无脂浊的肝素抗凝血，离心弃去血浆，加入等体积生理盐水，离心洗涤3次（3 500 r/mim，10 min），最后离心后弃去上层生理盐水，加入等体积去离子水，-20 ℃冷冻过夜。解冻后以相同条件离心，去除细胞碎片和漂浮物，取上层血红蛋白液为血红蛋白储存液。用COULTER Gen.S System2全自动血球分析仪测定3次血红蛋白浓度，平均值为112 g/L。 3．标本黄疸模型的制备（胆红素储存液）：使用胆红素纯品进行溶解，得到高浓度胆红素溶液（根据EP7-A2文件要求在实验过程中尽可能小地稀释样本基质，最好不超过5%。因此干扰剂原液的浓度至少应为实验测试浓度的20倍）。用生理盐水稀释30倍后在AU640生化仪上进行总胆红素浓度测定，平均值为445 μmol/L，计算得胆红素浓度为13 350 μmol/L。 4．标本脂浊模型的制备（甘油三酯储存液） 利用本院药房20%脂肪乳剂注射液（英脱利匹特）用生理盐水分别稀释100倍和50倍后在AU640生化仪上进行甘油三酯浓度测定取平均值，换算得脂肪乳原液甘油三酯浓度为475.05 mmol/L。 5．“配对-差异”（Paired-Difference） 5．1 临床可允许的最大干扰范围的确定：根据分析物的生理变异确定无机磷的总误差（TE）为10.2%[1]，建立有临床意义差别的可接受标准（dmax）定为总误差10.2%的1/4值。 5．2 计算实验需要重复测定的次数：根据EP7-A2文件提供双侧检验的实验重复次数公式（s为无机磷重复标准差，n为测定次数）。 5．3 制备基础样本：选取我院健康体检个体中肉眼检查质量良好（无溶血、无黄疸、无脂浊）的新鲜混合血清，并用磷酸二氢钠纯品调整分析物浓度到医学决定浓度（EP-A2文件推荐的分析物测试浓度）。 5．4 对照样本和干扰样本的制备见表1。 表1 对