疟原虫镜检技术.ppt

恶性疟原虫--环状体 环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫 薄血膜间日疟大滋养体形态 感染的红细胞：胀大褪色，出现形状大小相等、分布均匀、数目较多、鲜红色的薛氏小点。 虫体大小：较大。 胞浆：不规则，浅蓝色，出现阿米巴伪足，有空泡。 核： 红色，一个。 疟色素：有，细小杆状，黄褐色，分布不均匀。 间 日 疟 大 滋 养 体 虫体不规则，较大；阿米巴样空泡明显；疟色素细小，黄褐色。 间日疟大滋养体 恶性疟大滋养体 受感染红细胞：大小正常，颜色较深，可出现较粗、大小不一、分布不匀、数目较少红色茂氏小点。 虫体大小：较小。 胞浆：蓝色，圆形，坚实，体积小。 核：一个，红色。 疟色素：较细的黑褐色颗粒，常集成块。 恶性疟大滋养体 红细胞：胀大，褪色，可有薛氏小点。 胞浆：较不规则，空泡小或消失，浅蓝色。 核： 红色，分裂为二个以上。 色素：黄褐色，分布不均匀。 间日疟未成熟裂殖体 薄血膜疟原虫形态 间 日 疟 未 成 熟 裂 殖 体 * 疟原虫的RDT检测 及镜检技术 丰城市疾病预防控制中心 检验科：黄曾 2014-7-15 疟疾的实验室诊断 1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确诊最可靠。 2.免疫学诊断：（1）循环抗原的检测 （2）循环抗体的检测 3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。 分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾的“金标准” 仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。 ★ 快速诊断试纸条可与镜检疟原虫相互补充。 疟原虫抗原检测 （一）原理 快速检测试剂是通过在硝酸纤维素膜（NC）试纸条上产生可见的条带来检测抗原的一种“免疫-层析”试剂。染色标记抗体与疟原虫抗原结合，复合物由试剂条检测线上的抗体捕获后，形成一条可见的条带（检测线）。 检测的第一步是将溶血剂与血液混合，破坏血红细胞释放疟原虫蛋白，便于与标记抗体靶蛋白结合；然后将血液与标记抗体的混合液置于硝酸纤维试纸条上，并通过毛细管作用和缓冲液/清洗剂推力，使混合液在试纸条上移动并通过检测线与对照线。 OptiMAL IT卡疟疾快速诊断 试剂盒使用说明书 4.将吸血后的毛细管竖立于凹槽2中，捏出全部血液并与凹槽中稀释液混匀约1分钟。 血膜的制作（取血时间） 采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗期和间歇期五期。 间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低，镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。 发热期，外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小时（h），间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，初发患者退热后常查不到原虫。 末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状体之后的10天左右。 血膜的制作（取血操作） 在采集标本、制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址。 采血部位和方法：采血部位一般人为耳垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。 取血部位和血量 采血部位和取血方法： 耳垂或无名指（婴幼儿母趾或足跟），通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒大米（即火柴头）大小。 血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。 发热病人血片 标本片 血膜的制作（涂片操作） 涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人，涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查； 标本片 发热病人血片 标签 薄血膜的制作 薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均