肺炎支原体的耐药性.ppt

肺炎支原体的耐药性 辛德莉 首都医科大学附属北京友谊医院 2018年4月12日 MPP的流行病学变化 趋势1：社区获得性肺炎的重要病原菌,发病率有上升趋势； 趋势2;发病年龄低龄化（学龄前儿童、婴幼儿发病增多） 趋势3：难治性/重症病例增多 趋势4：出现耐药，中国耐药率高； 全球范围内MP耐药情况 2010-2012 加拿大12.1% 2010-2014 美国8.2~13.2% 2010-2012 88.1%~100% 2008-2012 澳大利亚3.3% 2011-2012日本87.1%~89.2% 2010-2015英国0-9.3% 2010-2011 丹麦1.6% 2007-2011 法国3.4~8.3% 2003-2012 德国1.2~3.6% 2010意大利26% 2010以色列22%~30% 文献报道国内部分地区MP耐药数据 日本MP耐药数据变化情况 可以看出，耐药MP在日本出现的时间报道比较早，呈上升趋势 首例 近年来北京市支原体耐药监测情况 自2012年开始，为贯彻落实《抗菌药物临床应用指导原则》，牵头组织了北京市支原体耐药监测的工作，北京市肺炎支原体对大环内酯类的耐药率依然保持在较高水平，尚未发现对四环素类和喹诺酮类抗生素耐药的MP菌株。 大环内酯类耐药机制 肺炎支原体耐药主要检测手段 分离培养+药敏实验：实验的周期长，分离培养阳性率不高，不适用临床诊断。 传统分离培养+药敏； 快速培养+药敏(一体化）试剂盒 分子药敏：PCR扩增大环内酯类抗生素耐药相关靶位基因，不同方式检测其耐药性，近年来发展较快。 PCR+基因测序：针对23SrRNA基因扩增+测序，标准基因序列比对; 单链构象多态性分析：巢式PCR产物+毛细管电泳-单链构象多态性检测，与标准株图形比较; 高分辨率溶解曲线分析：23SrRNA V区域所有已知与耐药相关的突变位点区域进行扩增，根据高分辨率溶解曲线形态判断突变类型; 分子开关：应用敏感性分子开关(高保真DNA聚合酶和3’硫化修饰引物的分子开关),通过琼脂糖凝胶上的条带或直接观察荧光信号检测MP对大环内酯类药物的耐药性(高或低）；， AS-PCR：最新研究MP耐药检测方法-等位基因特异扩增实时定量PCR方法（AS-PCR)，可以同时检测样本中存在的敏感菌和耐药菌,并进一步确定其比例，为临床治疗提供参考和依据。 检测耐药基因位点，发现临床样本可以中同时存在2063A和2063G位点；也就是说在一份临床样本中同时存在敏感菌和耐药菌的混合感染。在检测的178份临床咽拭子标本中，ASPCR检测的总阳性率为92.1%（164/178） 敏感菌14例，占8.5%；耐药菌36例，占 21%；耐药敏感混合114例，占69.5%。 也就是说：敏感菌存在128/164，占78%；耐药菌 150/164，占91.4%。这提示我们，在临床治疗MP感染的病人时，需要注意敏感菌和耐药菌的混合感染。 耐药的检测：等位基因特异扩增实时定量PCR方法建立 国内文献报道的MP耐药监测数据 2011年北京84.4% 2012-2014 湖南邵阳92%盒m 2015年无锡88.2%pm 2015年河北90% 2008年北京91% 2005-2008上海81.4% 2005-2010温州58.5% 2003-2006年北京92% 2007-2008年广东40% 2009-2011上海87.5% 2013年河南33% 2010-2011 湖南47.1% 2010-2012北京71.7% 2014年贵州27.63% 2010年广东54.5% 大环内酯类抗生素耐药现状？ 各地区耐药率差异的产生与哪些因素有关？ 数据的可靠性如何？ 检测技术和方法对结果是否产生了影响？ 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 MP耐药监测数据的回顾及思考 不同年代、不同国家、不同地区、不同人群、不同检测方法的耐药率是有差异的。（真与假），治疗方案要调整。 MP耐药监测数据的回顾及思考 耐药的最新研究：等位基因特异扩增实时定量PCR方法建立及数据 针对大环内酯类抗生素耐药严重的现状，传统耐药检测手段已不能满足临床需求。 如何准确快速检测临床样本中是否存在耐药菌和敏感菌的混合感染？同时鉴定出敏感菌和耐药菌的比例？ 针对上述问题，研究建立了一种准确快速诊断MP感染和耐药基因型，并进一步鉴定样本中敏感菌和耐药菌比例的新方法：即等位基因特异扩增实时定量PCR（Allele-specific real-time PCR(ASPCR)）的建立 ASPCR检测出MP的阳性率92.1%（164/178）。 其中：野生敏感型14份（8.5%），单纯A2063G