高效液相色谱仪使用中常见故障及解决.pdfVIP

效液相色谱仪使用中常见故障及 解决方法 1 高效液相色谱仪系统 液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检 测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言，柱子、泵和检测 器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。 2 常见问题及解决方法 高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正 确操作的话，就容易导致一些问题。其中最常见的就是柱压问题、 漂移问题、峰型异常问题。 2.1 柱压问题 柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意 的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保 留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒 定值而是指压力波动范围在50PSI （3.3 Bar）之间（在使用梯度洗 脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都属于 柱压问题。 2.1.1 压力过高 这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压 力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应 该分段进行检查。 (1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK 管里充满液体，使PEEK 管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下， 则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30% 的硝酸浸泡半个小时， 在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在 检查； (2).打开Purge 阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降， 则是过滤白头堵塞。处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙 醇超声半个小时。如果压力降至100PSI (6.7 Bar) 以下，过滤白头正 常，在检查； (3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理 方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95% 的水冲至压力正常。如果是 一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相 冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则 可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。 这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不 甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。 2.1.1 压力过低 压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法： 寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧 即可。当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往 是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。处 理方法：打开Purge 阀，用3-5ml/min 的流速冲洗，如果不行，则 要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。 2.2 ．漂移问题 主要包括基线漂移和保留时间漂移。 2.2.1 基线漂移 一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概 要半个小时的平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就 是在低波长下（220nm）平衡时间相对会比较长，但如果你在实验 过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因： 1、柱温波动。解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否 有打开的窗户或空调对着柱温箱。 2 、流通池被污染或有气体。 解决方法：用甲醇或其他强极性溶 剂冲洗流通池（最好断开柱子）。如有需要，可以用1N 的硝酸（不 要用盐酸）。 3、紫外灯能量不足。解决方法：更换新的紫外灯 4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。解决方法：检查流动 相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC 级的溶剂。 5、样品中有强保留的物质（高K ’值）以馒头峰样被洗脱出，从 而表现出一个逐步升高的基线。解决方法：使用保护柱，如有必 要，在进样之间。在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。 6、检测器没有设定在最大吸收波长处。解决方法：将波长调整至 最大吸收波长处 7、流动相的PH 值没有调节好。解决方法：加适量的酸或碱调至 最佳PH 值 2.2.2 保留时间漂移 保留时间重现是液相性能好坏的一个重要 标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s ，超过了半 分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性，你要考虑以下原因： 1、温控不当。解决方法：调好柱温，检查是否有打开的窗户或空 调对着柱温箱。 2 、流动相比例变化。解决方法：检查四元泵的比例阀是否有故障 3、色谱柱没有平衡。解决方法：在每一次运行之前给予足够的时 间平衡色谱柱 4、流速变化。解决方法：重新设定流速 5、泵中有气泡。解决方法：、从泵中除去气泡 2.3 峰型异常问题 峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程 中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各 样的