快速检测心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫微流体测试卡-分析化学.PDFVIP

第44卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第4期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016年4月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 633~639 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.160045 快速检测心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫微流体测试卡 1,2 1 1,2 1,2 3 4 *1 孟凡达 摇 霍卫松摇 贺美琳 摇 李 昊 摇 廉 洁摇 石西增摇 高云华 1(中国科学院理化技术研究所光化学转换和功能材料重点实验室,北京100190) 2 3 (中国科学院大学,北京100049)摇 摇 (中国人民公安大学刑事科学技术系,北京 100038) 4(东莞博识生物科技有限公司,东莞523808) 摘摇 要摇 研制出一种以时间分辨荧光微球作为标记,自驱动快速检测H鄄FABP 的荧光免疫微流体测试卡。 利 用激光切割法在双面胶上简便、快速地切割出所设计的微通道结构,并采用激光切割法制作出聚甲基丙烯酸 甲酯(PMMA)测试卡底板及上盖。 使用提拉涂膜的方法在PMMA底板表面修饰马来酸酐官能团,有效地解 决了捕获抗体在PMMA表面的固定问题。 使用等离子体处理测试卡上盖改善其亲水性,使液体能够在微通 道内自行流动。 使用此测试卡可以实现对心型脂肪酸结合蛋白(H鄄FABP)的快速检测,线性检测范围为 0.5~100 ng/ mL,检出限为0.1ng/ mL(S/ N=3),检测时间少于10 min,批内相对标准偏差(RSD)10%,批间 RSD15%。 本方法具有灵敏度高、检测时间短、结果准确等优点,可以满足临床检测的需求,具有良好的应用 前景。 关键词摇 心型脂肪酸结合蛋白;检测;微流体;时间分辨荧光 1摇 引摇 言 微流控技术的发展为蛋白的快速及其高通量的检测提供了一个新的思路及平台[1~6] ,并且大大降 低了检测成本。 与传统的分析方法相比,微流体检测具有高效、快速、试剂消耗少、自动化等优点。 目 前,用于制作微通道的材料主要有单晶硅、无定形硅、玻璃、石英、高分子聚合物,如环氧树脂、聚脲、聚 氨、聚苯乙烯(PS)和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)以及聚二甲基硅氧烷(PDMS)等[7~10]。 高分子聚合物 相比于无机材料具有种类多、价格低廉、加工方法多种多样以及容易实现批量生产等优势,已成为制作 微流体芯片的首选材料。 其中PMMA 因其出色的光学性能、良好的加工特性、生物亲和性好等优点而 [11] 被广泛用于体外诊断领域 。 但是PMMA仍旧存在着表面难以修饰蛋白、表面疏水性强、背景荧光相 对较高等缺点,因而限制了其在微流体器件制作中的应用。 此外,简单、高精度微通道的加工制作仍是 微流体检测技术的主要难点之一。 心脏型脂肪酸结合蛋白(Heart鄄type fatty acid binding protein,H鄄FABP)是一种低分子量蛋白质(相 [12] 对分子量为15000) ,主要担负结合脂肪酸并调节其细胞内代谢的功能。 作为心肌细胞质特异性蛋 白,H鄄FABP能够在心肌损伤的早期释放入血液,因此可作为心肌损伤的一种新的标志物,用于急性心 肌梗塞(Acute myocardial infarction,AMI)的早期诊断。 目前,H鄄FABP 的检测方法主要有酶联免疫法、侧 向层析法、免疫比浊法等[13~16] ,但它们或存在着操作费时繁琐,或存在着灵敏度、准确性差,或过分依赖 于大型检测仪器等缺点,从而限制了其在即时检测(Pointcare of test,POCT)中的应用。 时间分辨荧光免疫分析法(Time鄄resolved