基于ITS序列鉴别真菌类药材马勃及其混伪品-世界中医药.PDFVIP

世界中医药　２０１６年５月第１１卷第５期 ·７７７· 基于ＩＴＳ序列鉴别真菌类药材马勃及其混伪品 １，３ １ ２ １ １ １ ３ １，３ 张嘉丽 　黄宇航 　宋　明　任阳阳　张梦婷 　刘　霞　孙　伟 　陈士林 （１武汉理工大学化学化工与生命科学学院，武汉，４３００７０；２安利（中国）植物研发中心，无锡，２１４１４５； ３中国中医科学院中药研究所，北京，１００７００） 摘要　目的：运用ＩＴＳ序列鉴别真菌类药材马勃Ｌａｓｉｏｓｐｈａｅｒａｃａｌｖａｔｉａ及其混伪品。方法：收集来自重庆、北京等９个地方 的２１份脱皮马勃、大马勃、紫色马勃样品，提取基因组ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后双向测序。同时从 ＧｅｎＢａｎｋ上下载常见马勃 药材混伪品的序列。将所有序列进行剪切校准拼接后分析，基于Ｋ２Ｐ（Ｋｉｍｕｒａ２Ｐａｒａｍｅｔｅｒ）模型计算马勃及其混伪品的种 内和种间遗传距离，并构建ＮｅｉｇｈｂｏｒＪｏｉｎｉｎｇ（ＮＪ）系统聚类树。结果：大马勃的ＩＴＳ序列种内最大Ｋ２Ｐ遗传距离为０；脱皮 马勃的ＩＴＳ序列种内最大Ｋ２Ｐ遗传距离为０００３；紫色马勃的ＩＴＳ序列种内最大遗传距离为０００３。大马勃与混伪品种间 最小Ｋ２Ｐ遗传距离为００１９，脱皮马勃与混伪品种间最小Ｋ２Ｐ遗传距离为００３１，紫色马勃与混伪品种间最小Ｋ２Ｐ遗传 距离为０６３４。大马勃、脱皮马勃、紫色马勃的种内最大遗传距离均小于它们与混伪品的种间最小遗传距离。ＮＪ树结果 显示大马勃、紫色马勃、脱皮马勃各自聚为一支，表现出良好的单系性，能够与混伪品明显的区别开来。结论：基于ＩＴＳ序 列的条形码技术可以将马勃药材及其混伪品有效进行鉴别。 关键词　马勃；混伪品；ＩＴＳ；条形码 ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＬａｓｉｏｓｐｈａｅｒａＣａｌｖａｔｉａａｎｄＩｔｓＡｄｕｌｔｅｒａｎｔｓＵｓｉｎｇＩＴＳＢａｒｃｏｄｅ １，３ １ ２ １ １ １ ３ １，３ ＺｈａｎｇＪｉａｌｉ ，ＨｕａｎｇＹｕｈａｎｇ，ＳｏｎｇＭｉｎｇ，ＲｅｎＹａｎｇｙａｎｇ，ＺｈａｎｇＭｅｎｇｔｉｎｇ，ＬｉｕＸｉａ，ＳｕｎＷｅｉ，ＣｈｅｎＳｈｉｌｉｎ （１ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＷｕｈａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０， Ｃｈｉｎａ；２Ａｍｗａｙ（Ｃｈｉｎａ）ＢｏｔａｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒ，Ｗｕｘｉ２１４１４５，Ｃｈｉｎａ；３Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ ＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓｕｓｅｄａｓａｂａｒｃｏｄｅｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＬａｓｉｏｓｐｈａｅｒａＣａｌｖａｔｉａａｎｄｉｔｓａｄｕｌｔｅｒａｎｔｓＭｅｔｈｏｄｓ：Ｗｅｃｏｌ ｌｅｃｔｅｄ２１ｓａｍｐｌｅｓｏｆＬａｓｉｏｓｐｈａｅｒａＣａｌｖａｔｉａａｎｄｅｘｔｒａｃｔｅｄｔｈｅｉｒＤＮＡ，ｔｈｅｎａｍｐｌｉｆｉｅｄｔｈｅｉｒＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｓＷｅａｌｓｏｄｏｗｎｌｏａｄｅｄｓｅ ｑｕｅｎｃｅｓｏｆＬａｓｉｏｓｐｈａｅｒａＣａｌｖａｔｉａ’ｓａｄｕｌｔｅｒａｎｔｓｆｒｏｍＧｅｎＢａｎｋＳｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅａｓｓｅｍｂｌｅｄａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｔｈｅｉｒｖａｒｉａｂｌｅｓｉｔｅｓＴｈｅ Ｋｉｍｕｒａ２Ｐａｒａｍｔｅｒ（Ｋ２Ｐ）ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｓａｎｄｃｏｍｐｕｔｅｔｈｅＮｅｉｇｈｂｏｒｊｏｉｎｉｎｇ（ＮＪ）ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｗｅｒｅｃｏｍｐｕｔｅｄＲｅ