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啮齿柠檬酸杆菌SYBRGreenI-上海动物研究中心

第39卷第5期 中国预防兽医学报 V01.39.No.5 2017年5月 ChineseJournalofPreventive Medicine May.2017 Veterinary doi:10.39698.issn.1008-0425.2017.05.13 GreenI 啮齿柠檬酸杆菌SYBR 荧光定量PCR检测方法的建立 冯 诚2+ 洁1,一,谢建云2,张泉1,魏晓锋2,胡建华2,高 (1.扬州大学兽医学院,江苏扬州225009; 2.上海实验动物研究中心上海市实验动物质量监督检验站,上海201203) 摘要:为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(C.rodentium)espB基因的方法,本研究根据GenBank中登录的 C.rodentium SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法。结 B基因序列设计1对特异性引物,建立了C.rodentium esp 果显示,在102拷贝/止~10s拷贝/斗L浓度范围内标准曲线循环阂值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法仅对 C.rodenfimn进行特异性扩增,而对牛棒状杆菌、鼠伤寒沙门茵、嗜肺巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡 萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。其检测灵敏度可达24拷贝/斗L。 组内和组间试验变异系数均小于1%,重复性良好。临床样品初步应用结果显示,荧光定量PCR阳性检出率为 SYBRGreen I荧光定量PCR检测方法为实验动物C.rodentium的检测和流行病学调查提供了技术支撑。 Green 关键词:啮齿柠檬酸杆茵;SYBR I;荧光定量PCR 中图分类号:$852.61 文献标识码:A GreenI basedreal—timePCRmethodfor ofSYBR Development rodentium detectionofCitrobactef FENG Jiel,一,XIE Quanl,WEIXiao—feng,HUJian—hua2,GAOChen92+ Jian—yun2,ZHANG of University,Yangzhou225009,China: (1.CollegeVeterinaryMedicine,Yangzhou AnimalResearch Centerof Monitoring LaboratoryAnimals,Shanghai201203,China) 2.ShanghaiLaboratory Center,ShanghaiQuality Abstract:Toestablisha and methodforCitrobacterrodentiumrodentium SYBRGreenI based rapid specific detection,a

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