流式细胞仪AccuriC6操作规程.PDF

流式细胞仪Accuri C6 一、启动Accuri C6 仪器 ① 依次开仪器电源、电脑显示器及主机电源 ② 5～10 分钟后，双击电脑桌面“CFlow Plus ”图标，进入仪器控制软件界 面。软件界面信号灯指示为黄色，显示仪器与电脑没有连接好；软件界面 信号灯指示为绿色，显示仪器与电脑已连接好 ③ 检查仪器旁边四个液体容器，清空“Waste ”桶中的废液，检查“Sheath”、 “Cleanning fluid ”、“Decontamination ”三个桶中液体量是否满足实验要 求，若存放时间超过1 个月，则需要进行更换。其中“Sheath”为超纯去 离子水，“Cleanning fluid ”有效氯离子为1％的次氯酸钠，“Decontamination ” 为细菌消毒液，1295µl 杀菌液原液用超纯水定容250ml ④ 载物台上放置空管，点击软件界面Instrument/Run backflush cycle ，可以看 见少许液体从进样针中流出来，作用为反冲，清除进样针中的残留物 ⑤ 在软件96 孔板界面中任选1 孔，载物台上放置1 管去离子水， ⑥ 选择运行速度为“High ”，运行时间设置为10 分钟，点击“Run ”按钮运 行10 分钟自动停止。该步骤的作用是：激光器预热，清晰管路 ⑦ 该孔收集数据后变为蓝色，鼠标选中该孔，点击“Delete Sample Data ”， 删除孔内数据，启动步骤完成，即可开始检测样品 二、Accuri C6 样品检测 ① 将样品放置在载物台上，在软件96 孔界面选择样品的位置，并命名 ② 设置检测停止条件。（1）无限制检测Run unlimited ，手动点击停止；（2 ） 收集多少个细胞后停止，在events 框中填写；（3 ）收集多长时间停止， 在min 和sec 框中填写；（4 ）收集多少体积停止，在µl 框中填写 ③ 在Fluidics 框设定进样速度，可选择慢速、中速和快速，或者在Custom 框中手动设置进样速度 ④ “Set Threshold”设定阈值，需要根据实验设定合适的阈值，阈值设置太 低，背景荧光对目标细胞的荧光信号产生较大的干扰，阈值设置太高， 无法有效检测目标细胞 ⑤ “Set Color Compensation”设定颜色补偿，一般在数据处理分析过程中 进行 ⑥ 点击“Run ”按钮，开始样品检测 三、样品检测过程中注意事项： ① 样品之间无需用去离子水冲洗，当完成所有样品检测时，必须运行 Instrument/Cleanning fluid cycle 清晰程序。检测结束后，在载物台上放置 1ml 有效氯离子为1%的次氯酸钠，点击清晰程序开始清晰 ② 样品检测过程中发现每秒细胞数量减少，表明管路发生堵塞，需要运行 Backfush ，再用去离子水清洗2 分钟 ③ 每个样品测定完，需及时保存测定数据 四、关闭Accuri C6 （1）在任意1 个打开的文件下，在96 孔界面中任选1 空白孔，载物台上放 置0.1%次氯酸钠溶液，高速运行2 分钟 （2）在96 孔界面中任选1 空白孔，载物台换上去离子水，高速运行2 分钟， 多余的去离子水一直留在载物台上 （3 ）按一下仪器前方电源按钮关闭仪器，信号灯由绿色变为黄色，显示仪 器正在关闭，关闭过程中大约需要10 分钟 （4 ）关闭软件，不用保存清洗步骤所产生的数据，关闭电脑及显示器。注 意：C6 和电脑控制软件相对独立，关闭C6 和退出控制软件不讲究先 后顺序 五、Accuri C6 的日常维护 （管路清洗） （1）开仪器、电脑显示器、主机及软件，仪器稳定后，清洗上样针：在上样 针下面放一张吸水纸或者空管子，用来接滴下的水滴，运行Instrument/Run Black flush cycle ，清除上样针里面的残留物 （2 ）运行去碎片化循环（Unclog ）：在上样