分子镇痛-未来疼痛治疗的新策略.ppt

* 疫苗广泛应用于传染病的预防， 最近的研究发现疫苗也能够用于神经系统疾病的治疗。 * NMDA受体的2B亚基（NR2B）在疼痛的产生及中枢性痛觉敏化形成中起到重要作用 疼痛引起脊髓和前脑相关区域（扣带回、岛叶皮质等）的NR2B表达水平增高，利用NR2B拮抗剂、NR2B siRNA拮抗NR2B或下调NR2B的表达，均可缓解疼痛。 * 将NR2B基因插入血清5型腺病毒，构建NR2B重组腺病毒，recombinant adenovirus 5-mediated NR2B (rAd5/NR2B) ，也就是镇痛疫苗 * 口服免疫，镇痛机制 大鼠给予镇痛疫苗rAd5/NR2B灌胃注射， rAd5/NR2B感染小肠淋巴组织，表达NR2B多肽， 诱导机体产生NR2B特异性抗体。 改抗体在疼痛时透过血脑屏障，作用于中枢神经系统的NR2B，产生镇痛作用。 * 免疫细胞通常难以识别整个抗原分子，而仅识别抗原大分子上的一个特定的部分，称为表位(epitope) 。 图片显示的是电脑模拟抗原抗体复合物的立体构象。 * 1.合成NR2B多肽 2. 利用噬菌体肽库技术从NR2B多肽中筛选NR2B抗原表位， 3.通过基因重组技术合成NR2B抗原表位的基因序列， 4.将NR2B表位基因插入腺病毒，构建NR2B表位疫苗rAd5/eNR2B， 5.检测镇痛作用。 缺点：表位筛选困难。在众多表位中筛选最有镇痛效果的表位抗原，是一项浩大的工程，需要投入很多人力财力。 * NR2B不仅参与疼痛的传递和中枢敏化，而且广泛参与机体的多种生理活动，如神经元凋亡、学习记忆、突触可塑性（长时程增强，LTP）、运动功能等，并在其中起着重要的作用 * 虽然对大鼠在微观的突触电生理方面产生一定的副作用，但其幅度有限，尚不足以引起对大鼠在整体动物水平的改变。 * 分子靶向治疗一种以细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的新型治疗，在发挥更强治疗作用的同时，减少对正常细胞毒副作用，有的放矢地进行治疗 分子靶向治疗方法以其高效、低毒的功效受到医学界的广泛重视。目前在乳腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、胃肠道间质瘤、淋巴瘤等恶性疾病的治疗过程中，多种分子靶向治疗药物已经获准用于临床一线治疗。 我们将分别从受体靶向技术和基因靶向技术两方面探讨靶向技术在疼痛治疗中的应用。 * 延髓头端腹内侧核（RVM）是脑干下行抑制/易化系统的重要结构，在伤害性信号传递的调制中起着关键性作用。 下行易化系统由μ阿片受体易化神经元构成的，在慢性疼痛状态下， μ阿片受体易化神经元兴奋性升高，可增强下行易化系统的作用，参与痛觉过敏的形成与维持。 图片显示的是下行抑制/易化系统，靶向毁损 μ阿片受体易化神经元，可阻断疼痛的下行易化系统，达到镇痛的目的。 * 分子靶向技术中的一种就是受体靶向技术,配体偶联物，由配体或配体片段与药物连接而成，其中药物包括放射性核素、化疗药物、毒素和基因片段等。配体偶联物能通过结合受体特异性识别靶细胞，可以实现基因治疗疼痛的主动靶向性。 * 我们所构建的靶向工具为内吗啡肽-caspase 3耦联体，它是将内吗啡肽和目的基因caspase 3通过化学方法合成的复合物，既保留了内吗啡肽自身对u阿片受体的高亲和力，有具有caspase 3的细胞毒性作用。 该耦联体结合靶细胞的u受体，后者通过内吞作用介导耦联体进入细胞形成吞噬体 在溶酶体的作用下，吞噬体膜破裂，耦联体中的连接键亦发生断裂，释放出游离的质粒表达caspase 3，导致细胞死亡。 优点：1. 2. 比乙醇、手术等毁损方法相比，具有非常准确的靶向性，减少了副作用。 3.一般利用基因治疗转染神经元的效率低下，利用配体的特异性结合作用，显著提高转染率 缺点：配体与基因的耦联技术复杂，相应的成本很高。 镇 痛 疫 苗 疼痛 NR2B NR2B拮抗剂 NR2B siRNA 以NR2B为靶点，将NR2B作为抗原诱导机体产生NR2B抗体，拮抗NR2B或下调其表达，用于癌痛治疗 NMDA受体2B亚基 NR2B疫苗 构建NR2B全基因镇痛疫苗 NR2B重组腺病毒 recombinant adenovirus 5- mediated NR2B (rAd5/NR2B) 质粒pDC515/NR2B转染293细胞 镇痛疫苗rAd5/NR2B NR2B全基因镇痛疫苗 NR2B特异性抗体 镇痛疫苗rAd5/NR2B NR2B多肽 大鼠免疫后产生NR2B抗体的滴度 “ ”加强免疫的时间 1 2 NR2B ? 180kDa β-actin ? 42kDa 3 与空白对照组和病毒空载体组比较，*P＜0.05 大鼠免疫后脊髓NR2B表达下调 1：空白对照组 2：病毒空载体对照组 3：病毒疫苗免疫