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第十三章 生化药物和基因工程药物 分析概念 基本要求 概述 质量检验的基本程序与方法 常用定量分析方法及其应用 练习与思考 基本要求 第一节 概 述 一、防病、治 病的三大药源 1．生化药物： 例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。 三、特点 1. 生物体的基本生化成分 2. 分子量大: 分子量测定 3. 结构难确证 4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、 最终产品 5. 生物活性检查 一、鉴别 理化鉴别法：化学鉴别法 紫外分光光度法 HPLC法 生化鉴别法：酶法 电泳法 等电聚焦法 生物鉴别法：家兔惊厥试验 2.紫外分光光度法 溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml 判断： λmax：257±1nm A250/A260：0.17～0.27。 3. HPLC法： 利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留 时间和肽图谱的一致性进行鉴别。 4.酶法： 例：尿激酶的鉴别---气泡上升法 原理： 方法： 取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小时内不溶。 6. 生物法： 利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。 利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注50%GS，惊厥停止。 （三）安全性试验 热源试验 异常毒性试验 :急性毒性物质 过敏试验：异性蛋白 降压物质试验：导致血压降低的杂质、组 胺、类组胺 （四）含量测定 生化药物和基因药物的含量表示方法： 百分含量：适用于结构明确的小分子药 物或经水解后变成小分子的 药物。 生物效价或酶活力单位：适用于酶类、 蛋白质类药物。 测定： 样品---肽 样品水解：5.7mol/L盐酸，0.1%苯酚、通N2， 110℃，20h ～24h。 样品干燥：真空 样品的衍生化：丹酰氯 水解剩余的衍生化试剂：0.4mol/L NaOH 进样测定 3）HPGFC 应用：蛋白质、多肽的分离及分子量测定。 示例：重组人肿瘤坏死因子衍生物的分子量 的测定 柱：Beckman Ultraspherogel SEC 3000 流动相：0.1mmol/LKH2PO4:0.1mmol/LNa2SO4 （1:1）0.05%叠氮化钠 样品测定： 2）检查： 检查项目：有关物质、高分子蛋白、锌、氮、 干燥失重、无菌、细菌内毒素。 有关物质：供试液经梯度洗脱，按峰面积归一化 法计算有关物质的量不得超过3.0%。 高分子蛋白质： 3）效价测定： 固定相：ODS C18 流动相：硫酸盐缓冲液-乙腈（74︰26） 系统适用性试验：测定胰岛素主峰和A21脱氨胰 岛素峰之间的分离度与拖尾因子。 含量测定：分别进样供试液和对照液，按峰面积 外标法计算含量。 允许液体传送流经过分离介质内表面，使样品由流动相直接灌注入介质颗粒中，扩散作用不再是主要的。 介质颗粒内部可利用反应的表面积增加，容量和分辨率也随之增
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