实验诊断学-病原微生物检查.ppt

温州医学院检验医学院 温州医学院附属第一医院 临床病原体检查目的 明确感染是否发生以及病原体的类型。 提供体外微生物药物敏感实验的结果。 密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。 配合相关机构进行流行病学调查。 本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、病毒性肝炎检测 五、院内感染 一、细菌检验标本采集与送检的基本原则 1.注明被检人姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况。 2.尽量在抗生素使用前采集标本。 3.在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格执行无菌操作，避免杂菌污染。 4.立即送到实验室，某些细菌还应注意保温、保湿。 5.盛标本容器须经灭菌处理，勿用消毒剂。 二、常见标本的采集：血液与骨髓 1.采血部位多为肘静脉，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采集血标本，无菌操作。 2.每瓶采血量为5～10ml左右， 培养基与血液之比以10:1为宜， 以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。 3.选择寒战发热之初采血。对已用抗菌药物而又不能停药者，应在下次用药前采血。 4.每例建议不同时间不同部位采血3次，注意区别 感染菌和皮肤污染菌。 尿液标本的采集 1.中段尿采集：最常用的方法。采样前须消毒尿道口将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。 2.导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起逆行感染。不可从集尿袋下端管口留取标本。 3.膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌培养或婴幼儿。 粪便标本的采集 1.挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约2～3克盛于灭菌容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入Cary-Blair运送培养基中送检。 2.对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集送检。 呼吸道标本的采集 1.自然咳痰：清水反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰为好。 2.气管镜下采集法、气管穿刺法：下呼吸道病原学的理想标本，可减少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。 3.应及时送检和处理(1小时)，放置时间长可导致肺炎链球菌，流感嗜血杆菌等的检出率明显下降。  脑脊液等无菌体液标本的采集 1.严格无菌条件下采集标本。 2.尽量采集多的标本送检。 3.尽快送检或床旁接种可 提高阳性率，特殊标本 需保温送检。如脑膜炎奈瑟菌、 肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。 其它标本的采集(伤口、烧伤创面、脓肿等) 1.无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物，立即送检。 2.对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检，也可以切开排脓时用无菌拭子采样。 3.生殖道标本包括尿道口分泌物、外阴糜烂物、宫颈口分泌物、前列腺液等，应注意保温。 三、检查方法 1.直接涂片、镜检：初步诊断但阳性率低。如抗酸染色找结核杆菌。 2.分离、培养、鉴定：金标准较费时（3天）,同时可进行药物敏感试验。 3.血清学检查：如肥达氏试验、军团菌抗体检查等。抗体检测应进行双份血清检测，两次抗体效价相差4倍以上有现症诊断价值，但无早期诊断意义。 （但IgM有早期诊断意义） 主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、病毒性肝炎检测 五、院内感染 耐药性及发生机制 1.当前临床分离的常见细菌 (1)革兰阴性菌 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等，占70%。 (2)革兰阳性菌 葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、卡他布兰汉菌等，占30%。 2.耐药机制 (1)耐药基因的整合子系统 (2)产生灭活抗生素的水解酶或钝化酶 (3)改变抗生素作用的靶位 (4)细菌膜的外排泵出系统 (5)生物膜的形成，提高耐药性 3、药物敏感试验 (1)K-B纸片琼脂扩散法：最常用，操作相对方便 (2)稀释法 包括琼脂稀释法和肉汤稀释法 可获得最小抑菌浓度（MIC），但较麻烦 (3)E试验 ：结合稀释法和扩散法，价格昂贵 4.重点耐药菌株监测试验 ☆ (1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的筛选 (2)氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌 (HLAR)筛选 (3)耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)筛选 (4)染色体Ι型β-内酰胺酶AmpC酶的检测 ☆(5)超广谱?内酰胺酶(ESBL)检测 5.病原菌耐药基因的检测 (1)适全生长缓慢的细菌如结核分枝杆菌 (2)对病原菌的耐药具有确证意义 (3)考核其它耐药性检查方法的金标准,可能成为未来耐药性检查的主导方法。