山东省执业药师继续教育辅导材料-高效毛细管电泳法在药物分析中的应用.ppt

高效毛细管电泳法在药物分析中的应用 该内容共分两部分进行介绍第一部分 概述第二部分 高效毛细管电泳技术的分离模式及应用 第一部分 概述 高效毛细管电泳法(HPCE )又称毛细管电泳法(capillary electrophoresis，CE）。 是以毛细管为分离通道，以高压电场为驱动力，依据供试品中各组分之间淌度（单位电场强度下的迁移速度）和（或）分配行为上的差异而实现分离的新型液相分离分析技术。 一、高效毛细管电泳法的特点 HPCE和普通电泳相比，由于其采用高电场，因此分离速度快；检测器则除了未能和原子吸收及红外光谱连接以外，其它类型检测器均已和HPCE实现了连接检测；一般电泳定量精度差，而HPCE和HPLC相近；HPCE操作自动化程度比普通电泳要高，与传统的电泳相比主要有四个特点，即高效、快速、微量和自动化。 毛细管电泳技术兼有高压电泳及高效液相色谱等优点，其突出特点是: 二、毛细管电泳的基本装置与操作 毛细管电泳的基本装置由高压电源、毛细管、检测器、电解质贮液槽、进样器、控制系统及数据处理系统组成。 几个主要部分的特点: 进样：最常用的进样方式为流体力学方式和电动方式两种。 分离：分离部件主要包括毛细管、毛细管恒温系统和电源。毛细管材料应具有化学和电学惰性、紫外可见光透光性、柔韧性、强度高和便宜等特性。熔融石英是毛细管的首选材料，最常用的是内径为25～75μm的毛细管。 检测：紫外可见光检测是最常用的检测方式，但是受到仪器、单波长等因素的限制，目前应用最广泛的是二极管阵列（PDA）检测器。 液体的处理：该系统包括自动进样装置、缓冲液更换系统和缓冲液的水平系统等。 完成典型的HPCE实验，一般包括以下操作步骤： 移开进样端的电解质贮液槽，换上样品管 使用低压或电迁移方式进样 换电解质贮液槽 加上分离电压 样品分离，用检测器进行检测 三、毛细管电泳法的基本理论 电泳 是指在电场作用下，溶液中的带电粒子作定向移动的现象。单位电场下的电泳速度称为淌度或电迁移率。 离子所带电荷越多，解离度越大，体积越小，溶液粘度越小，有效淌度就越大，其电泳速度就越快。这也是电泳分离及其条件选择的根本依据之一。 电渗 高效毛细管电泳操作中一个基本组成部分是电渗流（electroosmosis，EOF）。电渗流是毛细管内壁表面电荷所引起的管内液体的整体流动，来源于外加电场对管壁溶液双电层的作用。 CE所用的石英毛细管柱，在pH3的情况下，其内表面带负电，和溶液接触时形成双电层。在高电压的作用下，双电层中的水合阳离子引起流体整体向负极方向迁移的现象叫电渗。 电渗流是毛细管中的溶剂因轴向直流电场的作用而发生的定向流动。 电渗流的方向 多数情况下，电渗流速度是电泳速度的5-7 倍。 因此，在毛细管电泳中利用电渗流可将正、负离子和中性分子一起朝一个方向产生差速迁移，在一次CE 操作中同时完成正、负离子的分离测定。由于电渗流的大小和方向可以影响CE 分离的效率、选择性和分离度，所以成为优化分离条件的重要参数。用来控制电渗流的方法主要有改变缓冲溶液的成分和浓度；改变缓冲溶液的pH 值；加入添加剂；毛细管内壁改性；外加径向电场；改变温度等。 四、影响高效毛细管电泳分离的因素 3. 分离电压 相对较高的分离电压会提高分离度和缩短分析时间，但电压过高又会使谱带变宽而降低分离效率。 第二部分 高效毛细管法的分离模式及应用 1、毛细管区带电泳 CZE 2、毛细管凝胶电泳 CGE CGE 是毛细管自由溶液区带电泳派生出的一种电泳方式 ，用多孔性的凝胶或其它筛分剂作介质，网状结构，按分子的大小分离 3、毛细管等速电泳 capillary isotachophoresis ，CITP  4、 胶束电动毛细管色谱（MECC，MEKC） 5、毛细管等电聚焦 CIEF 6、毛细管电色谱 capillary electroosmostic chromatography ，CEC 二、高效毛细管电泳法在药物分析中的应用 高效毛细管技术在药物分析中的应用大致可以分为两部分： 一是原料药的定量、原料药中杂质的测定、药物制剂分析以及对它们稳定性的评价等以药品质量控制为目的的测定方法。 二是对进入人体内的药物或代谢物的吸收、分布、代谢、排泄等体内动态的研究，即临床药物分析。 （一）HPCE在药品质量控制方面的研究应用 1．HPCE在中药分析中的应用 具有分离效率高、分析速度快、分析时间短、样品前处理简便、进样