生物药物分析.ppt

》基因工程的基本过程 A.获得目标基因 是基因工程的前提和核心 有多种方法可以获得外源基因 构建基因文库，从库中调取 化学合成 PCR等 B.将目标基因与基因载体进行重组 载体：能把外源基因带入宿主细胞中，并能在宿主细胞中自主复制的DNA分子。 载体种类很多： 有细菌体内提取的质粒 也有病毒载体等 C.重组DNA分子转导进入受体（宿主）细胞 外源基因与载体连接形成重组体 重组体要通过一定的方式进入导受体细胞中 转化的方法很多： 有感受态细胞 也有电转 D.受体细胞的筛选 对导入重组体的受体细胞进行筛选和鉴定 ※应用： 开发活性蛋白质和多肽类药物 包括：酶、激素、疫苗、细胞生长因子、单克隆抗体 4、现代生物技术药物 主要用于治疗传统药物难以治愈的疾病，如： 癌症、心血管疾病、艾滋病（12.1）、 遗传病等 传统药物的增长率为5－7％ 生物技术药物销售额每年以25％的速度增长 目前研究现状： 1、开发新药 2、增长已有的蛋白质药物的适应症 3、延长药物的半衰期 二、主要的基因工程药物 目前以DNA重组技术为基础的生物技术药物主要有 基因工程重组蛋白质或多肽类药物 基因工程抗体 基因工程疫苗 有关杂质测定方法： 聚丙烯酰胺凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 凝胶HPLC 》紫外分光光度法 多糖在200nm或200nm处有最大吸收。 紫外分光光度法于200nm－400nm处进行扫描，在260nm和280nm处无吸收，如有吸收峰表示可能混有核酸或蛋白质。 检查部分可能水解的低聚糖 （二）常规杂质检查 无机物、重金属、铁盐、砷盐等的限度检查。 三、含量测定 比色法 紫外分光光度法 HPLC GC 生物测定法 柱前衍生化 例如： 1、硫酸软骨素 水解产物 288nm最大吸收 专属性强 2、肝素 生物检定法（抗凝血作用） 延长新鲜兔、猪血凝结时间的作用。 过量酸 第三节 糖类药品检验 一、硫酸软骨素 来源：猪的喉骨、气管等组织中提取 的酸性粘多糖药物。 功能：维持组织免疫机能 （一）含量测定： 1、比色法： 酸水解 氨基已糖 产物 红色 2、紫外分光光度法 过量酸水解 产物288nm吸收峰 二、香菇多糖 1、单糖测定 香菇多糖 碘液滴定测定无水葡萄糖的含量，不得超过15％。 碱性 乙酰丙酮 二甲氨基苯甲醛盐 不水解 碘液滴定 2、香菇多糖含量测定 香菇多糖 同1法碘液滴定 总的单糖含量－1的结果＝香菇多糖的含量 香菇多糖经酸水解后无水葡萄糖量不得少于85％。 酸水解 三、灵孢多糖 来源：赤芝子实体产生的担孢子经提取制成的灭菌水溶液。 功能：调节植物神经功能紊乱，改善微循环，增强机体免疫力。 多糖 620nm吸收峰 蒽酮 四、绒促性素 性质：糖蛋白激素 来源：怀孕45－90天的孕妇尿液中提取 生物检定法测定： 对幼小鼠子宫增重的作用 五、肝素 来源：猪、牛、羊肠粘膜提取 功能：天然抗凝血物质 结构：六糖或八糖重复单位组成的线性分子 效价测定： 1、天青A法：含氨基的碱性染料天青A结合了肝素后本身的最大吸收向短波移动。 2、色原底物法： 肝素＋抗凝酶＝复合物 对凝血酶有抑制作用（量与肝素呈负相关） 用色原底物测出 六、肝素钠 来源：兔、牛肠粘膜中提取 结构：硫酸氨基葡聚糖的钠盐 粘多糖物质 生物检测法： 兔、猪血浆凝结时间的延长作用 七、低分子肝素 功能：抗血栓药物 来源：肝素分级或降解获得 平均相对分子量8000 药典规定至少有60％量的低分子肝素 并且抗FXa活性不得低于70U/mg （一）抗FXa活性测定 （二）平均相对分子质量的测定 第四节 脂类药品检验 一、熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸 分子结构含有羧基 用酸碱滴定法 二、谷固醇 谷固醇 沉淀 过滤 洗 涤 干燥 称重 每1克沉淀物相当于0.253g谷固醇 洋地黄皂苷 乙醇液 三、大豆磷脂 含有磷 磷酸 磷钼酸 钼蓝 620nm吸收 四、辅酶Q10 递氢体，免疫增强剂 1、紫外分光光度法 氧化型Q10