【儿科PPT课件】流式细胞术在微小残留（MRD）检测中的应用.ppt

流式细胞术在微小残留（MRD）检测中的应用 一、MRD概念 指白血病患者经诱导治疗达临床缓解后，体内残存的少量白血病细胞。此时白血病细胞仍可达1010，是复发的根源。研究表明当体内白血病细胞小于106时，肌体通过自身免疫机制可将之清除。即MRD检测敏感性应达到10-4，才有意义。 二、MRD检测意义 预报复发；指导缓解后治疗；指导干细胞移植（时机的把握、术后的监测）；判断预后和指导更精确的缓解标准。 三、 常用MRD检测方法原理及其优、缺点： 1、 传统的细胞遗传学：80%--90%的急性及95%以上的慢性儿童白血病有染色体的异常改变，如慢粒的PH染色体，这一特征可作为MRD检测指标。覆盖面广，但敏感性差（1%--10%）。尤其当基因改变不足以影响染色体大体水平时会成假阴性。 2、 荧光原位杂交（FISH）：依靠区域特异 DNA探针对染色体染色来鉴别染色体数量和结构的改变，从而区分白血病细胞。分子水平。敏感性差。 3、聚合酶链反应（PCR）：通过检测扩增的靶系列（染色体断裂点融合区、免役球蛋白及T细胞受体基因重排）来区分白血病细胞。敏感性最高10-6 。但覆盖面小（65%儿童ALL缺乏特异的含有断裂点融合区的染色体改变；另由于白血病细胞重组酶活性较强，重排基因可能进一步重排，造成假阴性。） 4、流式细胞术：根据白血病细胞表面或细胞内免疫分子来区别并计数白血病细胞。可以直接计数白血病细胞（PCR是根据扩增产物的量进行推算），并可区分活细胞或将要凋亡的细胞及碎片。敏感性10-4，较PCR低（但达到临床要求）；白血病进展及治疗后，免疫表型可能发生改变，造成假阴性。目前仍是最简单、直接、精确、使用的方法。 四、以ALL为例流式细胞术在MRD检测中的具体应用 1、原理 2、指标的选择：理想的指标是只在白血病细胞表达而不在正常细胞表达的抗原。尚未发现。但据白血病细胞抗原表达特点（跨系、时相紊乱、量的异常），及正常早期B细胞对糖皮质激素十分敏感等特点，仍能找出相应指标。常为几种抗原的组合。如CD34+/CD10+/CD19+ 3、时机选择：常在化疗第19天取第一次标本进行检测。此时白血病细胞及正常重建的细胞都存在；经过化疗后白血病细胞免疫表型可能发生改变，而此时已经经过一轮强烈化疗，今后再变的可能性较小；此时白血病细胞和正常重建细胞在流式图上的分布特点就是今后区分白血病细胞与正常细胞的依据。 4、常用抗体组合及其有效频率： TDT/CD34/CD10/CD19 65.71% CD38/CD34CD10/CD19 45.71% CD58/CD34/CD10/CD19 61.43% CD45/CD34/CD10/CD19 44.29% CD66c/CD34/CD10/CD19 32.86% CD22/CD34/CD10/CD19 12.86% 合计 91.43% TdT/CD10/CD34/CD19抗体组合 * *