miR-34b促进关节软骨细胞基质退变的分子机制研究.PDFVIP

江医学江医年第年第4040 卷第卷第44 期期 miR-34b 促进关节软骨细胞基 质退变的分子机制研究 王丹丹 陈刚 叶俏 鲍轶 官俏兵 m 摘要 】 目的 探讨微小RNA-34b（miR-34b ）促进关节软骨细胞基质退变的分子机制。方法 提取 10 例骨关节炎（OA ） 患者和7 例创伤性截肢者的膝关节软骨组织，实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR ）法检测组织标本中miR-34b 表达水平。利用 o Targetscan 基因信息软件预测得到miR-34b 靶基因为Smad3 ，构建Smad3 野生型及突变型3′非编码区（3′-UTR ）- 荧光素酶报 c . 告载体，利用荧光素酶报告基因实验检测 miR-34b 对Smad3 基因野生型及突变型3 ′-UTR 荧光素酶活性的影响。体外培养 s SW 1353 细胞，分为A 、B、C 和D 组，分别加入等量脂质体、无义序列、miR-34b 模拟物 （miR-34b mimic ）和miR-34b 抑制物 z （miR-34b inhibitor ）。RT-qPCR 法检测miR-34b 、Smad3、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶-13（MMP-13 ）的表达水平。结果 OA 软 骨组织中miR-34b 表达水平较正常膝关节软骨组织明显上调（P＜0.05 ）。SW 1353 细胞转染后，与A 组比较，C 组miR-34b 表达水平 z 明显升高（P＜0.05 ），D 组明显降低（P＜0.05 ）；A 组与B 组比较，差异无统计学意义（P ＞0.05 ）。Targets Can 软件预测miR-34b 的 x 潜在靶基因为Smad3 ，荧光素酶报告基因实验证实 miR-34b 直接靶向抑制靶基因Smad3 ；转染 miR-34b mimic 和 miR-34 y inhibitor 后，与A 组比较，C 组Smad3 mRNA 表达水平明显降低（P＜0.05 ），D 组明显升高（P＜0.05 ）；A 组与B 组比较，差异无统计学 j 意义（P ＞0.05 ）。转染后，与A 组比较，C 组Ⅱ型胶原mRNA 表达水平明显降低（P＜0.05 ），D 组明显升高（P ＜0.05 ）；C 组MMP-13 z mRNA 明显升高（P＜0.05 ），D 组明显降低（P＜0.05 ）。结论 miR-34b 可能通过抑制其靶基因Smad3 的表达进而诱导人关节软骨 . 细胞基质退变，从而促进OA 的发生、发展。 w 关键词】 微小RNA-34b Smad3 骨关节炎 软骨细胞基质 w Molecular mechanism of mirR-34b in promoting dege