基因捕获筛选TGF-β1诱导间充质干细胞C3H10T12平滑肌分化的差异表达基因.doc

基因捕获筛选TGF-β1诱导间充质干细胞C3H/10T1/2平滑肌分化的差异表达基因[基金项目] [基金项目] 国家自然科学基金面上项目； HYPERLINK / \t _blank 国家重点基础研究发展计划(973计划) (2005CB522605)；全军“十一五”计划一般课题(06H029) [通信作者] 邹仲敏，E-mail:zouzhmin@ 粟永萍，E-mail:suyp2003@163.com 王明科1,2,3，姜 帆4，孙慧勤1，叶 枫4，程 晋4，粟永萍1，邹仲敏4 (400038重庆，第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室1；200433 上海，海军医学研究所2；355200 福建 福鼎，解放军441医院3；400038 重庆，第三军医大学军事预防医学院毒理学研究所4) [摘要] 目的 利用基因捕获方法，分离转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)诱导小鼠胚胎间充质干细胞C3H/10T1/2(简称10T1/2细胞)平滑肌分化前后差异表达基因。方法 5 ng/mL TGF-β1诱导10T1/2细胞平滑肌分化，倒置显微镜下观察细胞形态学改变，RT-PCR鉴定平滑肌分化相关基因alpha平滑肌肌动蛋白(actin alpha, smooth muscle, αSMA)、平滑肌22 alpha (smooth muscle 22 alpha, SM22α)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain, SM-MHC)和血清应答因子(serum response factor, SRF)，免疫细胞化学实验检测aSMA。TGF-β1诱导建立的10T1/2细胞基因捕获阳性克隆库分化前后进行LacZ染色。cDNA末端快速扩增法(rapid amplification of cDNA ends, RACE)及电子克隆分离差异表达序列，在GenBank网站nBLAST进行生物信息学分析，用GenBank网站在线软件BankIt提交GenBank获取ID号，用pI/Mw软件计算蛋白分子量、等电点。Real-time PCR检测新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠、骨骼肌及心肌的表达。结果 细胞形态学、RT-PCR及免疫细胞化学实验鉴定TGF-β1成功诱导10T1/2细胞平滑肌分化。LacZ染色筛选获得2个平滑肌分化后差异表达克隆。RACE、电子克隆和nBLAST分析后发现为线粒体核糖体蛋白S6(mitochondrial ribosomal protein S6，Mrps6)和新基因mgt-16。mgt-16基因位于19号染色体，编码一个93个氨基酸的蛋白(命名为MGT-16)，相对分子质量为9772.02，等电点为6.04，提交后ID号为GU266552。新基因mgt-16在BALB/c小鼠小肠表达较高，而在骨骼肌、心肌表达较低。结论 利用基因捕获分离获得了TGF-β1诱导平滑肌分化前后2个差异表达基因：Mrps6和新基因mgt-16。 [关键词] 基因捕获；TGF-β1；间充质干细胞；平滑肌分化 [中图法分类号] [文献标志码] A Identification of differentially expressed genes upon TGF-β1 induced smooth muscle differention of mesenchymal stem cell lines C3H/10T1/2 cells by gene trap screening Wang Mingke1,2,3, Jiang Fan4, Sun Huiqin1, Ye Feng4, Cheng jin4, Su Yongping1, Zou Zhongmin4 (1State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Institute of Combined Injury, College of Preventive Medicine, Third Military Medical University, Chongqing, 400038; 2Naval Medical Research Institute, Shanghai, 200433; 3 No. 441 Hospital of PLA, Fuding, Fujian Province,355200; 4Institute of Toxicology, College of Preventive