裸鼠皮下移植人神经母细胞瘤模型的建立和HIF-l及其相关蛋白的表达.doc

PAGE PAGE 2 裸鼠皮下移植人神经母细胞瘤模型的建立和HIF-l及其相关蛋白的表达 孟庆磊 王家祥 张大 穆鑫 郑州大学第一附属医院小儿外科 郑州 450052 【摘要】 目的 探讨应用人神经母细胞瘤细胞株建立裸鼠皮下神经母细胞瘤模型和HIF-l及其相关蛋白在该模型中的表达，旨在了解HIF-l及其相关蛋白在神经母细胞瘤发生发展中的作用，为神经母细胞瘤（neuroblastoma NB）的发病机理研究和诊治提供新的思路与方法。方法 ①应用KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞株建立裸小鼠皮下移植瘤模型40只，作为肿瘤组；阳性对照组选取郑州大学第一附属医院小儿外科2006年1月至2010年1月手术切除的神经母细胞瘤肿瘤标本；阴性对照组选取正常裸鼠大脑组织。采用Envision 免疫组织化学方法检测各组组织中HIF-l、VEGF及TGF-的表达情况，并对试验结果进行统计学处理。②结合免疫组化结果将肿瘤组分为HIF-l阳性组与HIF-l阴性组，对两组的生存情况（体重变化、瘤体重量、存活天数）进行比较，并对试验结果进行统计学处理。结果 4周后解剖结果证实成模率80%；HIF-l及其相关蛋白的阳性表达均主要表现为细胞核及细胞质内棕黄色颗粒；肿瘤组织与正常组织HIF-l、VEGF、TGF-阳性表达率分别为75%、70%、80%和10%、6.7%、10%，三种蛋白在肿瘤组织与正常组织中的表达差异具有显著性（P0.01）,肿瘤组与阳性对照组HIF-l、VEGF、TGF-三种蛋白的IOD（阳性染色的积分光密度）值分别为141.97±7.98、151.85±14.35、139.94±4.50，141.34±6.44、144.06±8.51、149.00±13.63，均明显高于阴性对照组，p0.01。HIF-l在肿瘤组与阳性对照组中的表达与VEGF的表达成正相关（2 =7.778 r=0.504 P0.01），HIF-l在肿瘤组与阳性对照组中的表达与TGF-的表达无明显相关性（2 =1.429 P=0.232 P0.05）；HIF-l阳性组与HIF-l阴性组体重变化、瘤体重量及存活天数比较t值分别为：-3.43、3.69、4.30，P值均小于0.01。通过分析肿瘤组40例裸鼠生存时间与HIF-l表达水平的关系发现，HIF-l阴性组中位生存时间为24天，最长生存时间为33天；HIF-l阳性组中位生存时间为17天，最长生存时间为22天；生存时间分别用LogRank，Breslow，Tarone-Ware检验，P值均小于0.05。结论 ①该模型用于研究人类神经母细胞瘤，造模时间短，成瘤率高，生物学行为与人类神经母细胞瘤接近。②HIF-l、VEGF、TGF-在神经母细胞瘤中高表达，在肿瘤组织的表达明显高于正常组织。③ HIF-l与VEGF在肿瘤组织中的表达有明显相关性，HIF-l与TGF-在肿瘤组织中的表达无明显相关性，HIF-1与VEGF在肿瘤的血管浸润及转移过程中起了重要作用。④HIF-l阳性组小鼠较HIF-l阴性组小鼠体重减轻明显、瘤体体积大、存活天数短，说明HIF-l在神经母细胞瘤中阳性表达率的高低对神经母细胞瘤患儿的生存时间有明显的影响，HIF-l的高表达可以认为是代表预后不良的一个重要指标。 【关键词】 缺氧诱导因子； 神经母细胞瘤 ； 免疫组织化学 ；小鼠 ； 裸 Establishing human neuroblastoma model from subcutane transplantation in the athymic mice and HIF-l and its related proteins expression Meng Qinglei, Wang Jiaxiang, Zhang Da ，Mu Xin. Department of Pediatric Surgery, The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052,China Corresponding author: Jiaxiang Wang, Email: wangjiaxiang@zzu.edu.cn【Abstract】 Objective To establish human neuroblastoma model from subcutane transplantation in the athymic mice and observe HIF-l and its related proteins expression in order to find out if HIF- and its related protein