免疫学应用第15YE.pptVIP

流式细胞仪工作原理示意图 流式细胞仪结果图 淋巴细胞中CD8+细胞频率 知识拓展 流式细胞仪荧光标记与波长对照图 知识拓展 三、淋巴细胞功能的测定 1、淋巴细胞增殖实验 淋巴细胞增殖实验 2、T细胞介导的细胞毒试验：51Cr释放法 51Cr释放法细胞毒试验 第三节 免疫分子检测 免疫球蛋白的测定 补体测定 细胞因子检测 CD分子、表面受体和黏附分子的检测 HLA型别分析 难点内容 在体外用已知抗原检测相应抗体 用已知抗体对各类免疫球蛋白作定性、定量测定 检测血清含量高的IgG、IgA、IgM时，可用免疫比浊法； 检测IgD、IgE选用ELISA、RIA等灵敏度高的方法； 诊断免疫球蛋白异常性疾病（如骨髓瘤），可用免疫电泳等方法。 一、免疫球蛋白的测定 了解体内补体激活状况，辅助有关疾病的诊断 血清含量高的C3、C4、B因子等，可用免疫比浊法 其他含量低的成分则借助ELISA、RIA等方法 血清总补体活性测定常采用50%补体溶血法（50% complement haemolytic activity, CH50） 二、补体测定 CH50原理是： 用SRBC和兔抗SRBC作为抗原抗体复合物，通过经典途径激活补体而溶解SRBC。通常以50%溶血所需的最小补体量表示总补体活性。 1、免疫学测定法 用特异性抗体进行定量或半定量检测（ng/ml） 分泌性细胞因子：双抗体夹心法、ELISA、RIA、ELISPOT、免疫印迹法等方法 胞内细胞因子：FCM免疫荧光技术或者ELISPOT 三、细胞因子检测 2、生物活性测定法 　　根据细胞因子特定的生物学活性，借助相应指示系统，如选用各种依赖性细胞株或靶细胞，同时与标准品对照测定，从而得知样品中细胞因子活性水平，一般以活性单位（U/ml）表示。 3、分子生物学测定法 　　具体方法为聚合酶链反应（PCR）、实时定量PCR等。 用已知抗CD分子表面受体和黏附分子的抗体可鉴定细胞表面相应膜分子。 膜分子：间接免疫荧光法、流式细胞术等 可溶性分子：ELISA等 四、CD分子、表面受体和黏附分子检测 指纹图谱技术 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP) 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） 聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP) 聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP） 单核苷酸多态性分析（SNP） 五、HLA型别分析——基因分型 第四节 免疫诊断与监测（自学） 用免疫学方法确定疾病相关因子、监测疾病过程、判断疗效和预后。 疾病相关因子检测：肿瘤抗原、红细胞血型抗原、自身抗体、变应原抗体等； 免疫功能检测：CD4+T细胞数目减少用于艾滋病辅助诊断等； 免疫学检测：乙肝病毒抗原与抗体的消长等。 第五节 免疫预防 免疫学预防（immunoprophylaxis）： 即人工免疫，通过人工输入抗原物质刺激机体产生免疫效应，或直接输入免疫效应物质，从而特异性清除致病因子，达到预防疾病的目的。 自然免疫 机体感染病原体后建立的特异免疫（自然主动免疫），包括胎儿或者新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体（自然被动免疫）。 人工免疫（artificial immunization） 即免疫学预防，指采用人工方法，将疫苗、类毒素或含特异性抗体和细胞的免疫制剂接种于人体，以增强宿主的抗病能力。 人工主动免疫 人工被动免疫 一、基本概念 人工主动免疫(artificial active immunization) 是指给机体接种抗原性物质如疫苗、类毒素等，刺激机体免疫系统产生特异性免疫力的方法。 Definition:Artificial active immunization is inoculation with antigenic substances such as vaccines to provide specific immunity mainly for prevention. 人工被动免疫(artificial passive immunization) 是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞 因子等制剂,使受者迅速获得特异性免疫力的方法。 Definition:Injection of specific antibodies or other biologicals to provide bodies with corresponding immunity,mainly for emergent prophylaxis or therapy. 人工自动免疫与人工被动免疫的比较 人工自动免疫 人工被动免疫 产生免疫力的物质 抗原（疫苗、类毒素、瘤苗等）