实训九菌种移接资料.ppt

* * 实训九 菌种移接 * * 一、实验目的 熟悉各种接种工具的使用； 掌握菌种移接的基本方法； 熟练掌握无菌操作技术。 二、实验原理 无菌技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。 * * 三、实训材料和用具 超净工作台、接种工具、斜面培养基、酒精灯、酒精棉球、菌种、火柴、肥皂、标签纸等 * * 四、操作步骤： （一）常用接种工具的介绍 1.接种针 2. 接种钩 3.接种耙 4. 接种环 5. 接种圈 6. 玻璃涂棒正面观 7. 玻璃涂棒侧面观 注意：不同菌种的移接和不同的培养目的，需选用不同的接种工具。 * * （二）接种前的准备工作 1.微生物的无菌接种技术要点：防止污染，严格的无菌操作。 实验室：在超净工作台上进行。必须进行严格的消毒处理。 用酒精棉球擦净超净工作台台面 将接种管、酒精灯、接种工具等用品放在台面 于接种之前打开超净工作台紫外灯消毒30min，同时打开风机 接种时必须关闭紫外灯 * * 2.将接种管贴上标签，注明菌种名称、接种日期、接种人姓名等，标签应贴在接种管斜面的背面。 3.操作者用肥皂洗手，晾干后用酒精棉球将手、菌种管擦拭消毒。 * * 主要讲述斜面接种 ※斜面接种： 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。流程：点燃酒精灯→手持试管→环灭菌→拔棉塞→灼烧接种环→环冷却→取菌→接种→塞棉塞→环灭菌→培养 注意：除“培养”外此所有步骤均在超净工作台内进行。 （三）菌种移接的基本方法 * * 1、点燃酒精灯。 2、手持试管 取一菌种管和接种管，置左手食指、中指、无名指间，拇指压住两管底部上侧面，使菌种管位于外侧，培养基管位于内侧。将斜面向上，尽量放平。 3、接种环灼烧灭菌 右手持接种环，先垂直后水平将环部烧至红热，其余部分再在火焰上慢慢来回通过2～3次。 手持试管和接种环灼烧灭菌 * * 4、拔管塞：以右手小指与手掌，小指与无名指分别夹取棉塞（先外管后内管），将两管口迅速通过火焰1～2次(切勿烧得过烫)。 5、环灭菌：再灼烧接种环。 * * 6、取菌: 接种环冷却，轻沾取少量菌体或孢子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。 * * 7、接种: 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。 * * 8、塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。 9、将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。 10、培养：斜面朝下置培养箱中培养。 * * 温馨提示 1．接种人员在接种过程中尽量少说话，少走动。 2．每接完一支菌种后接种工具都要灼烧。 3．接种工具灼烧后要充分冷却，防止烫伤菌体。 4．接种要在酒精灯火焰无菌区进行。 5．操作过程中双手不要超出超净工作台边缘，头部不要探入工作台内。 * * 斜面接种时的无菌操作 (1) 环灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)沾取菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 演示 * * 作业： 1、接种成败的关键因素是什么？ 2、无菌操作的要点是什么？ 3、什么叫斜面接种？有哪些主要操作步骤？ * *