公猪精液采精跟稀释新.doc

公猪采精 PAGE PAGE 18 公猪采精与稀释操作规程 1、采精与精液处理流程（讲究卫生，控制温度） （1）采精过程流程 1、? 进入实验室后清洁双手 2、? 准备稀释液，并将稀释液放入35℃ 3、? 打开显微镜上的加热板控制开关，设定温度到38 4、? 安装集精杯（预热到37℃），准备 5、? 将公猪赶入采精室，关上栅栏，清洁其体表 6、排出包皮液用0.1％KMnO4溶液清洗其腹部及包皮，再用清水洗净，抹干。 7、? 戴上双层手套，诱导公猪爬跨假母猪 8、? 锁定并拉出阴茎 9、? 待排出部分清亮液体后，开始收集精液 10、将集精杯放入壁厨 11、将公猪赶回圈内 （2）精液处理操作流程 1．将一预温后的烧杯或塑料杯放在电子秤上，打开电子秤，当显示为零时，将装精液的食品袋从集精杯中取出放入杯中，显示读数为精液的重量。 2．将放精液的烧杯轻轻摇匀精液后，放入35℃ 3．立即用取样器取精液10～25微升左右，滴在载物台上预热的载玻片上，盖上盖玻片，估测活力。精子活力大于0.6，则可用于下一步的处理。 4．另取1毫升精液放入加有10毫升生理盐水的精子密度杯中，读出读数后，在查对表上查到精子密度值。 5．计算精液可分装的份数和最终的精液体积或重量。 6．将大烧杯放在电子秤上，除皮，然后再将精液袋放入其中，并将精液袋上口翻在杯沿外，将装稀释液的三角瓶从水浴锅中取出，擦去底部水分，将稀释液加入大烧杯中，直到达到计算的最终重量，轻轻摇动或用玻璃棒搅拌精液使其混合。 7、精液稀释后，检查精液活力，若无明显下降，开始分装。 8．将精液按规定重量分装于各个精液瓶（袋）中，排出空气后封口，进行精液标记，置22℃-25℃的室温1小时后(或用几层毛巾包被好后)，降温到20℃左右时 9．清洗各种容器并放于消毒柜中干燥消毒。 2、稀释液的配制过程? 2.1 配制过程 以1000毫升BTS稀释液为例，可用任一方法： ①经过清洗干燥消毒的三角瓶，将一袋BTS稀释粉（50克）全部加入瓶中，用量筒量取双蒸馏水1000毫升，加入三角瓶中。盖上盖子或用稀释粉袋套在三角瓶口上，封紧摇动，使稀释粉完全溶解。或放在磁力搅拌器上，搅拌加速溶解。取下盖子，放入35℃的水浴锅中预温。 　稀释液用过后，三角瓶应用蒸馏水冲洗，空干水分，然后将三角瓶、量筒用牛皮纸封口，放入80～120℃的消毒柜或干燥箱中烘干。 ②将两个食品袋相套放入大烧杯中或塑料杯中，放在电子秤上，打开电子秤开关，当电子秤上读数为零时， 将连接蒸馏水容器的硅胶管放出少量水后，将管口对准杯口注水，并注意读数变化，当接近1000克时，应放慢流速，改为滴注，直到1000克。之后，应将蒸馏水管的龙头套好，防止污染。 在大烧杯中加入一袋稀释粉（50克）。 从盛磁珠的小烧杯中取镊子并夹取磁珠，在废液缸上用洗瓶冲洗磁珠2-3次， 待磁珠上水分滴净后，放入烧杯中，然后将烧杯放在磁力搅拌器上，打开电源开关和加热开关，调整磁珠转速旋扭，使磁珠以适当速度旋转（水体形成涡流），使稀释粉全部溶解后，降低磁珠转速，关闭加热和电源开关。 将杯子放入35℃的水浴中预温。 注：不能控温的加热磁力搅拌器使用时间不可超过10分钟，或及早关闭加热电源；平时磁珠放在一个清洗干燥过的小烧杯中，注入新鲜蒸馏水半杯，镊子为不锈钢材料，也经清洗干燥放入杯中，盖上干净的培养皿，每3周应换掉陈水，冲净换上新的蒸馏水。稀释液加入精液中后，应用小烧杯中的镊子将磁珠从大烧杯中夹出，并在废液缸上冲洗磁珠和镊子前端3-4遍，待磁珠上水分滴净后，连同镊子放入小烧杯中，盖上培养皿。 这种方法由于稀释液是在一次性食品袋中配制的，因此，不需要对配制稀释液的容器进行清洗和消毒，实现了稀释液配制的免消毒。 冬季稀释粉溶解较慢，可将稀释粉与水混合后，放入水浴锅中预温10分钟，再摇匀，可加速稀释粉溶解。使用加热磁力搅拌器者不必在水浴锅中预温。 注：除大规模人工授精站外，一般不主张自己配制稀释粉，推荐使用商业化稀释粉，这些产品质量稳定可靠。另外，稀释粉与蒸馏水按什么比例混合是十分严格的，应按照说明书上的配比进行稀释粉的溶解，不可改变配比。 2.2 PH值与渗透压 用1N稀盐酸或1N氢氧化钠调整BTS稀释液的PH值为7.2(6.8-7.4)左右,渗透压为330mOsm 2.3 稀释液的保存 液态状稀释液冰箱4℃保存，不超过24小时，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。 3、采精前的准备 1.集精杯的准备应在实验室中进行。 用保温杯作集精杯时，不能直接将精液采入杯中。将两层食品袋装入保温杯内，并用洁净的玻璃棒使其贴靠在保温杯壁上，袋口翻向保温杯外，上盖一层专用过滤网，用橡皮筋固定，并使过滤网中部下陷3厘米，以避免公猪射精过快或精液过滤慢时，精液外溢。安装好后，将其放恒温箱在37℃温度下备用。