课件：六 肥达反应.ppt

原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及引起 副伤寒的副伤寒沙门菌H抗原与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。作为临床上诊断伤寒和副伤寒的参考。 实验材料 (1)待测血清(1:10)，伤寒杆菌O、H菌液，甲型副伤寒杆菌(PA)和乙型副伤寒杆菌(PB) H菌液，生理盐水。 (2)小试管，吸管，试管架，吸耳球(或橡皮乳头)，水浴箱，记号笔等。 方法： ①在试管架上放4排试管，每排支，做好标记。 ②每排每支试管各加入0.5ml生理盐水。 ③每排第1管中分别加入待测血清0.5ml。混匀后用吸管吸取0.5ml混合液加到第2管内。混匀后再从中吸取0.5ml液体到第3管中，如此重复直至第6管。第6管稀释完后吸取0.5ml混合液弃去。第7管不加待测血清作阴性对照。每一排试管均重复上述步骤。 ④在第1排每个试管中加入伤寒杆菌“O”抗原0.5ml，第2排，第3排和第4排则每管分别加入0.5ml伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌的“H”抗原。 ⑤将所有的试管充分振荡，使其混匀，置50℃水浴45分钟，取出观察结果。 肥达反应稀释法示意表 试验管（每管0.5ml） 对照管 1 2 3 4 5 6 7 生理盐水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 - 1 “O”抗原 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 2 “H”抗原 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 3 PA抗原 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 4 PB抗原 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清最终稀释度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 - 成分 产生抗体 产生特点 制备 反应特点 O抗原 LPS IgM 出现早 维持时间短 酒精处理或加热 反应速度慢 颗粒状凝集 H抗原 蛋白质 IgG 出现较晚，维持时间长 甲醛固定后使O抗原被遮盖 反应速度快 絮状凝集 血清的凝集效价（滴度）：是指能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集的血清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。 1、正常凝集效价 伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在1：80以下，伤寒沙门菌“H”抗体在1：160以下， 甲、乙型副伤寒沙门菌“H”抗体凝集效价在1：80以下。 2、病程中动态观察 二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义 3、O与H抗体在诊断上的意义 O H A B 诊 断 意 义（可能） 伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应 伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应 伤寒 甲型副伤寒 乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下 O 与H抗体在诊断上的意义 实验二 其他细菌 白喉棒状杆菌：G+ 一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏状或英文字母样，如V、W、X等 观察异染颗粒 炭疽杆菌：G＋ 粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央 肉毒梭菌：G＋ 粗大杆菌，芽胞位于近极端，成网球拍状 实验二 炭疽杆菌菌落 30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状