课件：兔自身免疫性干眼模型制作及检测.ppt

Your company slogan 兔自身免疫性干眼模型制作及检测 兔自身免疫性干眼模型 概要 通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞，建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉注射的方法诱发自身免疫性泪腺炎。从而建立稳定的兔自身免疫性干眼模型，对干眼临床指标及泪腺细胞因子表达进行检测。 兔自身免疫性干眼模型 实验动物 ： 成年雌性新西兰白兔，体质量2.6～3.5kg。 实验前进行兔子临床眼科检查, 排除已患有眼部炎症和其他疾病的动物，建立正常兔眼的临床检查指标的基线水平。 饲养环境符合医学实验动物环境的要求，动物饲养房温度为 25±2℃，相对湿度 50%～75%，12 小时光照昼夜循环，通风状况好。 兔自身免疫性干眼模型 实验所用的主要仪器、设备及材料 ： 生物超净工作台 CO2恒温细胞培养箱 移液枪 -80℃超低温冰箱 倒置相差显微镜 台式离心机 裂隙灯显微镜摄像系统 离心管、枪头 PCR仪 实时定量PCR仪 流式细胞仪 流式管 超纯水装置 低温水箱 裂隙灯显微镜 恒温水浴锅 眼科手术器械 祸旋仪 高压蒸汽消毒器 电子天平 鼓风式干燥箱 磁力搅拌器 PH测量计 荧光显微镜 SY-600恒温水箱 Nylon细胞滤网 兔自身免疫性干眼模型 主要试剂及溶液配制 ： 淋巴细胞培养基（CM） RPMI1640细胞培养基 450ml 胎牛血清（FBS） 10% 青链霉素 100U/ml L-谷氨酰胺 2mM 2-mercaptoethano 0.5ml 泪腺上皮细胞培养基（DMEM） DMEM（1X high glucose） 450ml 胎牛血清（FBS） 10% 青链霉素 100U/ml L-谷氨酰胺 2mM 兔自身免疫性干眼模型 主要试剂及溶液配制 ： Hams液 Hams F-12 1L Hepes 10ml/L 牛血清蛋白蛋白（BSA） 100U/ml 胰蛋白酶抑制剂 50mg/L 丁酸 0.22g/L 青链霉素 100U/ml L-谷氨酰胺 2mM 亚油酸 1mg/ml 42ul 各组分充分溶解于900ml Ham’s F-12后调节PH值至7.4，Ham’s F-12定容至1000ml，0.22μm 滤器过滤，4℃冰箱保存备用。 兔自身免疫性干眼模型 主要试剂及溶液配制 ： Hanks液 Hanks Salts 1bottle Hepes 2.38g EDTA 0.76g 各组分充分溶解于900ml 超纯水后调节PH值至7.4，超纯水定容至 1000mL， 0.22μm 滤器过滤，4℃冰箱避光保存。 混合消化酶（CDH） 胶原酶 collagenaseⅠ 450unit/ml 透明质酸酶 hyyaluronidase 200unit/ml DNA酶Ⅰ 25unit/ml 分别称取计算好的Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶，将其充分溶解于一定体积的 Ham’s液中，加入溶解分装好的 DNA 酶充分混匀，0.22μm 滤器过滤，4℃冰箱备用。 兔自身免疫性干眼模型 主要试剂及溶液配制 ： 10% Ficoll Ficoll 粉与 DPBS 按比例配制高压灭菌, 分装后-20C